【摘 要】
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利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3, 并将其与调控质粒 pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK), 转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选, 用多西环
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所, 省部共建吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室, 长春 130122东北师范大学生命科学学院, 长春 130022;军事医学科学院军事兽医研究所, 省部共建吉林省人兽共患
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利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3, 并将其与调控质粒 pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK), 转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选, 用多西环素(Dox)对获得的细胞系进行诱导表达鉴定, 并进行Dox敏感性分析、 IFITM3+细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶 (Luciferase)报告基因的禽流感病毒H5/H7蛋白或VSV G蛋白包裹的假型慢病毒颗粒进行感染实验, 检测萤光素酶活性.结果表明, 筛选获得了携带人IFITM3的MDCK诱导表达细胞系, 且IFITM3表达量与Dox剂量和诱导时间相关;确定Dox工作浓度为2.5 μg/mL, 诱导12 h时IFITM3+细胞数达75%以上, 且IFITM3在晚期内体/溶酶体存在分布;假型病毒感染及萤光素酶活性分析表明, IFITM3可显著抑制禽流感病毒H5, H7和VSV G蛋白介导的病毒进入, 为深入探究其具体的抑制机制奠定了基础.
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