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摘 要 为了解不同芦笋种质对茎枯病的抗性差异，采用孢子喷雾法对其幼苗进行喷雾后48 h保湿处理，7 d后统计分析各种质的发病情况并计算病情指数。结果表明：野生型大理天门冬和B7/TX-4病情指数均为0，为免疫种质；井冈701、TC山东、井冈全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6，病情指数均小于20，为中抗种质；太平洋2000病情指数为81.25，为感病种质。
关键词 芦笋 ；茎枯病 ；种质 ；抗病性 ；病情指数
分类号 S644.6 ；S436.44
芦笋（Asparagus officinalis L.）别名石刁柏、龙须菜，味道鲜美，营养丰富，是一种深受消费者喜爱的高档蔬菜，有“蔬菜之王”的美誉[1]。我国从引进芦笋以来，所种植的国外品种如格兰德F1、UC157F1等均不抗茎枯病，因国外培育芦笋品种的国家均为冷凉地区，芦笋茎枯病发生很轻或不发生，芦笋抗茎枯病不作为其育种目标[2-5]。进口品种引进后出现“水土不服”，不抗茎枯病而导致该病害大爆发。又因芦笋在国内的生长季节里均为湿热气候，茎枯病极易发生和发展，尤其在南方地区，该病害已严重影响了芦笋产业的发展[6-7]。目前，我国已经开展了芦笋品种的选育工作，成功选育出一批国产芦笋品种，并在生产上大面积应用，如井冈701，京绿芦1号等。同时，不同芦笋品种对茎枯病的抗性差异明显，在芦笋生产上筛选应用抗病、优质品种是一种防治芦笋茎枯病的有效途径[8-10]。本实验采用国内近年选育和收集的芦笋种质进行苗期抗茎枯病鉴定，以期为生产上选育抗病品种和防治该病害提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试芦笋种质
26个芦笋种质来自江西农科院、云南大学和本实验室收集保存的种质，分别为：B2-a/Tx-6（H）、B23（05）-①/B2（H）、B19-c（H）、B1-a/SD、B7-a/SD、B2-a/SD、B5-a/B33-b、B7-a（F2）、B7-b/B33-b、井冈翠、H666、B4-a/B20-a（紫）、B2-a/TX、B1/TX-7、B3/TX-6、B7/TX-4、井冈全雄（1）、井冈全雄（2）、TC山东、大理天门冬、紫色太平洋、井冈红、新世纪、井冈701、冠军、太平洋2000。
1.1.2 供试菌株
供试菌株为本实验室大田采集分离后测定的致病力最强的菌株BT05。
1.2 方法
1.2.1 芦笋种子的浸种催芽
芦笋种子播种前要先进行浸种催芽，方法为将种子先用清水漂洗，将种子用30～35℃的温水浸泡48 h，浸泡期间每天换水1～2次，之后将种子滤出，放入盆中，上面盖上一层湿布，置于25～28℃的环境中进行催芽，并每天用清水淘洗2次。当种子有10%的胚根开始露白时，即可进行播种。播种后每隔一天浇水一次，直到种子发芽出苗，之后常规管理。
1.2.2 接种
当接种有BT05菌株的培养基内长出孢子后，用纱布过滤孢子，置于血球计数板上测定孢子浓度，播种采用随机区组设计，设3个重复和1个对照，每个重复3株。播种后待幼苗生长至15～20 cm时开始接种。之后用移液枪吸取淡黄色孢子粘稠液，用灭菌水配成孢子悬浮液，浓度为106个/mL，用小喷壶喷雾接种。接种后将黑色育苗袋移入铝钵盘中并用一有机透明塑料袋罩住，在饱和湿度下放置48 h，在温度25～28℃的条件下让其自然感病。之后去掉罩子，再按接种前苗期管理程序管理，第8天观察各处理的发病情况并根据分级标准确定每个重复的病级，计算病情指数。
1.2.3 病情指数级抗性评价标准
病情分级标准参考文献[10]。
0级：无发病；1级：发病面积占株冠面积的10%以下；2级：发病面积占株冠面积的11%～30%；3级：发病面积占株冠面积的31%～50%；4级：发病面积占株冠面积的50%以上；根据病级计算病情指数。见图1。
病情指数计算方法参考文献[5]。
DI=∑（每个重复中各个病级株数×病级值）/（每个重复总株数×4）×100
免疫：病情指数0；抗病：0<病情指数≤10；中抗：10<病情指数≤20 中感：20<病情指数≤40；感病：病情指数>40[9]。
1.2.4 数据处理
用SAS9.0软件的Duncan氏新复极差法（DMRT）进行差异显著性分析。
2 结果与分析
2.1 供试芦笋种质的抗病性筛选
由表1可知，供试的26个芦笋种质对茎枯病的抗病性存在显著性差异。从结果中筛选出免疫种质2个，分别为野生型大理天门冬和B7/TX-4，病情指数均为0，抗病种质1个为TC山东；中抗种质6个，分别是井冈701、井冈全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6；中感种质为11个，分别为B1-a/SD、B2-a/Tx-6（H）、B5-a/B33-b、B7-a（F2）、B7-b/B33-b、井冈翠、H666、B2-a/TX、B1/TX-7、井冈全雄（1）、新世纪，病情指数在21～40；B7-a（F2）、紫色太平洋、冠军、井冈红、B23（05）-①/B2（H）、太平洋2000这6个种质为感病种质；由此表1还可得知，太平洋2000的病情等级最高，平均值达到了5，极显著高于井冈701、TC山东、井冈全雄（2）、B3/TX-6、B4-a/B20-a（紫）、B2-a/SD、B19-c（H），而与冠军、B23（05）-①/B2（H）、紫色太平洋、井冈红等种质的差异性不明显。野生型大理天门冬和B7/TX-4病情等级最低，为0，极显著低于太平洋2000、冠军、井冈红、B23（05）-①/B2（H）、B19-c（H）、紫色太平洋，显著低于B7-a（F2）、B1/TX-7、新世纪，与其他种质差异不显著。因此野生型大理天门冬、B7/TX-4、TC山东、井冈701四个种质的抗性可能是最强的，可以为生产上芦笋种植时品种的选择上提供依据。 3 讨论
本实验采用改进的苗期室内人工喷雾孢子的方法做抗病性鉴定实验，与之前国外文献Sonoda等所用的贴菌环绕茎一周的方法[5]相比较，省时、省工，还能较好且真实的反映出芦笋苗期的抗病性，外界环境影响较小。该方法也为材料较多情况下的实验提供了帮助。抗病性指标病情分级标准和国外文献根据有无病斑、病斑大小、有无分生孢子器等方面制定的4级分级标准[5]相比较，本实验按照杨迎青等制定的分级标准，试验证明，该方法具有较高的可信度，能准确的反映出芦笋茎枯病的发病状况、发病等级，也证明了采用孢子人工接种喷雾法和病情严重度分级标准来考察芦笋种质对茎枯病的抗病性差异是一种高效、快速又方便的鉴定方法。
采用该方法所得实验结果表明：野生型大理天门冬和B7/TX-4的病情指数均为0，为高抗种质，这也符合野生型种质抗病性程度较高的特性。野生型大理天门冬是一个野生型种质，还没有被引种进入大规模栽培种植，在自然条件下较抗外界恶劣环境，对各种病虫害也有较好的抵抗能力。其次，井冈701、TC山东、井冈全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6等种质也相对较抗芦笋茎枯病，这一结果和周倩[1]所描述的各个品种的抗茎枯病的强弱程度相一致。抗性最差的种质为太平洋
2000和B23（05）-①/B2（H），病情指数分别为81.25和72.5。本实验筛选到的芦笋高抗种质可以为以后生产上选种育种提供参考。
参考文献
[1] 周 倩. 芦笋高效栽培关键技术[M]. 北京：金盾出版社，2009：30-47.
[2] Gonzalez M I，Adel P O Z O. Asparagus cultivar trials in Bio Bio（vili）region of Chile[J]. Acta Hortic， 2002， 589： 117-121.
[3] 罗绍春，周劲松，汤泳萍，等. 芦笋种植前景与开发价值分析[J]. 中国农学通报，2007（23）：98-100.
[4] Paschold P J， Artelt B，Hermann G. Comparison of white asparagus cultivars（Asparagus officinalis）in Germany[J]. Acta Hortic， 2008，776： 379-386.
[5] Takahiro Sonoda. Evaluation of Asparagus officinalis Cultivars for Resistance to Stem Blight by Using a Novel Inoculation Method[J]. Hort Science， 1997，32（6）： 1 085-1 086.
[6] 曾小红，张慧坚，刘恩平. 我国芦笋种质资源及生物学研究进展[J]. 广东农业科学，2012（10）： 56-60.
[7] 张金良，刘登雷，杨建国，等. 中国芦笋茎枯病相关研究进展[J]. 植保土肥，2012（4）：104-106.
[8] Qingjun Z，Leilei C，Xin S，et al. Evaluation of the Adaptability of 28 Green Asparagus Cultivars[J]. Agricultural Science and Technology， 2013， 14（2）： 235-242.
[9] 阮宏椿，石妞妞，杜宜新，等. 不同芦笋品种苗期对茎枯病的抗性鉴定及其农艺性状观察[J]. 福建农业学报，2013，28（3）：241-244.
[10] 杨迎青，李湘民，孟 凡，等. 芦笋茎枯病抗性鉴定方法的建立及芦笋抗病种质资源的筛选[J]. 植物病理学报，2012，42（6）： 649-654.
关键词 芦笋 ；茎枯病 ；种质 ；抗病性 ；病情指数
分类号 S644.6 ；S436.44
芦笋（Asparagus officinalis L.）别名石刁柏、龙须菜，味道鲜美，营养丰富，是一种深受消费者喜爱的高档蔬菜，有“蔬菜之王”的美誉[1]。我国从引进芦笋以来，所种植的国外品种如格兰德F1、UC157F1等均不抗茎枯病，因国外培育芦笋品种的国家均为冷凉地区，芦笋茎枯病发生很轻或不发生，芦笋抗茎枯病不作为其育种目标[2-5]。进口品种引进后出现“水土不服”，不抗茎枯病而导致该病害大爆发。又因芦笋在国内的生长季节里均为湿热气候，茎枯病极易发生和发展，尤其在南方地区，该病害已严重影响了芦笋产业的发展[6-7]。目前，我国已经开展了芦笋品种的选育工作，成功选育出一批国产芦笋品种，并在生产上大面积应用，如井冈701，京绿芦1号等。同时，不同芦笋品种对茎枯病的抗性差异明显，在芦笋生产上筛选应用抗病、优质品种是一种防治芦笋茎枯病的有效途径[8-10]。本实验采用国内近年选育和收集的芦笋种质进行苗期抗茎枯病鉴定，以期为生产上选育抗病品种和防治该病害提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试芦笋种质
26个芦笋种质来自江西农科院、云南大学和本实验室收集保存的种质，分别为：B2-a/Tx-6（H）、B23（05）-①/B2（H）、B19-c（H）、B1-a/SD、B7-a/SD、B2-a/SD、B5-a/B33-b、B7-a（F2）、B7-b/B33-b、井冈翠、H666、B4-a/B20-a（紫）、B2-a/TX、B1/TX-7、B3/TX-6、B7/TX-4、井冈全雄（1）、井冈全雄（2）、TC山东、大理天门冬、紫色太平洋、井冈红、新世纪、井冈701、冠军、太平洋2000。
1.1.2 供试菌株
供试菌株为本实验室大田采集分离后测定的致病力最强的菌株BT05。
1.2 方法
1.2.1 芦笋种子的浸种催芽
芦笋种子播种前要先进行浸种催芽，方法为将种子先用清水漂洗，将种子用30～35℃的温水浸泡48 h，浸泡期间每天换水1～2次，之后将种子滤出，放入盆中，上面盖上一层湿布，置于25～28℃的环境中进行催芽，并每天用清水淘洗2次。当种子有10%的胚根开始露白时，即可进行播种。播种后每隔一天浇水一次，直到种子发芽出苗，之后常规管理。
1.2.2 接种
当接种有BT05菌株的培养基内长出孢子后，用纱布过滤孢子，置于血球计数板上测定孢子浓度，播种采用随机区组设计，设3个重复和1个对照，每个重复3株。播种后待幼苗生长至15～20 cm时开始接种。之后用移液枪吸取淡黄色孢子粘稠液，用灭菌水配成孢子悬浮液，浓度为106个/mL，用小喷壶喷雾接种。接种后将黑色育苗袋移入铝钵盘中并用一有机透明塑料袋罩住，在饱和湿度下放置48 h，在温度25～28℃的条件下让其自然感病。之后去掉罩子，再按接种前苗期管理程序管理，第8天观察各处理的发病情况并根据分级标准确定每个重复的病级，计算病情指数。
1.2.3 病情指数级抗性评价标准
病情分级标准参考文献[10]。
0级：无发病；1级：发病面积占株冠面积的10%以下；2级：发病面积占株冠面积的11%～30%；3级：发病面积占株冠面积的31%～50%；4级：发病面积占株冠面积的50%以上；根据病级计算病情指数。见图1。
病情指数计算方法参考文献[5]。
DI=∑（每个重复中各个病级株数×病级值）/（每个重复总株数×4）×100
免疫：病情指数0；抗病：0<病情指数≤10；中抗：10<病情指数≤20 中感：20<病情指数≤40；感病：病情指数>40[9]。
1.2.4 数据处理
用SAS9.0软件的Duncan氏新复极差法（DMRT）进行差异显著性分析。
2 结果与分析
2.1 供试芦笋种质的抗病性筛选
由表1可知，供试的26个芦笋种质对茎枯病的抗病性存在显著性差异。从结果中筛选出免疫种质2个，分别为野生型大理天门冬和B7/TX-4，病情指数均为0，抗病种质1个为TC山东；中抗种质6个，分别是井冈701、井冈全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6；中感种质为11个，分别为B1-a/SD、B2-a/Tx-6（H）、B5-a/B33-b、B7-a（F2）、B7-b/B33-b、井冈翠、H666、B2-a/TX、B1/TX-7、井冈全雄（1）、新世纪，病情指数在21～40；B7-a（F2）、紫色太平洋、冠军、井冈红、B23（05）-①/B2（H）、太平洋2000这6个种质为感病种质；由此表1还可得知，太平洋2000的病情等级最高，平均值达到了5，极显著高于井冈701、TC山东、井冈全雄（2）、B3/TX-6、B4-a/B20-a（紫）、B2-a/SD、B19-c（H），而与冠军、B23（05）-①/B2（H）、紫色太平洋、井冈红等种质的差异性不明显。野生型大理天门冬和B7/TX-4病情等级最低，为0，极显著低于太平洋2000、冠军、井冈红、B23（05）-①/B2（H）、B19-c（H）、紫色太平洋，显著低于B7-a（F2）、B1/TX-7、新世纪，与其他种质差异不显著。因此野生型大理天门冬、B7/TX-4、TC山东、井冈701四个种质的抗性可能是最强的，可以为生产上芦笋种植时品种的选择上提供依据。 3 讨论
本实验采用改进的苗期室内人工喷雾孢子的方法做抗病性鉴定实验，与之前国外文献Sonoda等所用的贴菌环绕茎一周的方法[5]相比较，省时、省工，还能较好且真实的反映出芦笋苗期的抗病性，外界环境影响较小。该方法也为材料较多情况下的实验提供了帮助。抗病性指标病情分级标准和国外文献根据有无病斑、病斑大小、有无分生孢子器等方面制定的4级分级标准[5]相比较，本实验按照杨迎青等制定的分级标准，试验证明，该方法具有较高的可信度，能准确的反映出芦笋茎枯病的发病状况、发病等级，也证明了采用孢子人工接种喷雾法和病情严重度分级标准来考察芦笋种质对茎枯病的抗病性差异是一种高效、快速又方便的鉴定方法。
采用该方法所得实验结果表明：野生型大理天门冬和B7/TX-4的病情指数均为0，为高抗种质，这也符合野生型种质抗病性程度较高的特性。野生型大理天门冬是一个野生型种质，还没有被引种进入大规模栽培种植，在自然条件下较抗外界恶劣环境，对各种病虫害也有较好的抵抗能力。其次，井冈701、TC山东、井冈全雄（2）、B4-a/B20-a（紫）、B19-c（H）、B2-a/SD、B3/TX-6等种质也相对较抗芦笋茎枯病，这一结果和周倩[1]所描述的各个品种的抗茎枯病的强弱程度相一致。抗性最差的种质为太平洋
2000和B23（05）-①/B2（H），病情指数分别为81.25和72.5。本实验筛选到的芦笋高抗种质可以为以后生产上选种育种提供参考。
参考文献
[1] 周 倩. 芦笋高效栽培关键技术[M]. 北京：金盾出版社，2009：30-47.
[2] Gonzalez M I，Adel P O Z O. Asparagus cultivar trials in Bio Bio（vili）region of Chile[J]. Acta Hortic， 2002， 589： 117-121.
[3] 罗绍春，周劲松，汤泳萍，等. 芦笋种植前景与开发价值分析[J]. 中国农学通报，2007（23）：98-100.
[4] Paschold P J， Artelt B，Hermann G. Comparison of white asparagus cultivars（Asparagus officinalis）in Germany[J]. Acta Hortic， 2008，776： 379-386.
[5] Takahiro Sonoda. Evaluation of Asparagus officinalis Cultivars for Resistance to Stem Blight by Using a Novel Inoculation Method[J]. Hort Science， 1997，32（6）： 1 085-1 086.
[6] 曾小红，张慧坚，刘恩平. 我国芦笋种质资源及生物学研究进展[J]. 广东农业科学，2012（10）： 56-60.
[7] 张金良，刘登雷，杨建国，等. 中国芦笋茎枯病相关研究进展[J]. 植保土肥，2012（4）：104-106.
[8] Qingjun Z，Leilei C，Xin S，et al. Evaluation of the Adaptability of 28 Green Asparagus Cultivars[J]. Agricultural Science and Technology， 2013， 14（2）： 235-242.
[9] 阮宏椿，石妞妞，杜宜新，等. 不同芦笋品种苗期对茎枯病的抗性鉴定及其农艺性状观察[J]. 福建农业学报，2013，28（3）：241-244.
[10] 杨迎青，李湘民，孟 凡，等. 芦笋茎枯病抗性鉴定方法的建立及芦笋抗病种质资源的筛选[J]. 植物病理学报，2012，42（6）： 649-654.