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目的
建立一种丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定方法。
方法采用温控紫外分光光度计同时测定2种丝氨酸蛋白酶抑制剂,重组Textilinin-1(recombinant Textilinin-1,Rtxln-1)与抑肽酶(aprotinin,AP)的抑制常数。优化活性测定方法的线性范围和孵育温度。应用此方法对Rtxln-1和AP进行活性测定,并对活性测定方法进行验证。
结果该方法的标准曲线拟合度决定系数≥0.98,测定Rtxln-1和AP的线性范围分别为10~50、0.056~0.560 nmol/L。Rtxln-1孵育温度为37 ℃,精密度的变异系数≤5%。
结论建立的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定方法特异性高、拟合度优,对Rtxln-1活性测定的精密度好,可用于AP、Rtxln-1等胰蛋白酶抑制剂的生物学活性的测定,也可用于广泛的丝氨酸蛋白酶抑制剂的活性测定。