【摘 要】
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目的 检测细胞因子对人视网膜色素上皮(RPE)细胞早期生长反应基因-1(Egr-1)的影响.方法 体外培养人RPE细胞,采用免疫荧光染色、Western blotting和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR
【机 构】
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解放军总医院第309临床部眼科,广州军区广州总医院药学部,第四军医大学西京医院眼科
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目的 检测细胞因子对人视网膜色素上皮(RPE)细胞早期生长反应基因-1(Egr-1)的影响.方法 体外培养人RPE细胞,采用免疫荧光染色、Western blotting和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)定性定量观察不同刺激因素作用下Egr-1蛋白和mRNA的表达变化.刺激因素包括:20 μg/ml脂多糖(LPS)、40 ng/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α、10 U/ml干扰素(IFN)-γ、30%单核/巨噬细胞株(THP-1细胞)上清液和正常人玻璃体液分别刺激0(未受刺激)、10、20、30、40、60 min.结果 在未受刺激的RPE细胞中Egr-1呈弱阳性表达,细胞浆为浅黄绿色荧光,随着刺激因素的作用,Egr-1的表达明显增强,细胞浆和部分细胞核呈强绿色荧光.20 μg/ml LPS、40 ng/ml TNF-α、10 U/ml IFN-γ、30%THP-1细胞上清液和玻璃体液刺激RPE细胞后,与未受刺激的RPE细胞相比,Egr-1 mRNA的最大增强幅度分别为1.9、1.3、1.4、1.2、1.4倍,Egr-1蛋白的最大升高幅度分别为3.4、1.2、1.7、3.2、1.3倍.结论 LPS、TNF-α、IFN-γ、THP-1细胞上清液和玻璃体液可上调体外培养的人RPE细胞Egr-1 mRNA和蛋白的表达,且出现核转位现象,说明这些刺激因素可引起Egr-1的活化.
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