大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化

来源 :生物化学与生物物理进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户：l_chuanfei

【摘要】

：

根据同源性分析设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,之后将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中.

【作者】

：

杨青胡学军许小明高晓蓉安利佳苏志国 J.C.JAN

【机构】

：

大连理工大学化工学院,大连,116012中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室,北京100080;Biosurface Science Center, BMC 577, 75 123 Up

【出处】

：

生物化学与生物物理进展

【发表日期】

：

2002年3期

【关键词】

：

类凝血酶克隆表达纯化特性表征

下载到本地 , 更方便阅读

下载此文赞助VIP

声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架

论文部分内容阅读

根据同源性分析设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,之后将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中.经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+Mut+在500 ml摇瓶中培养,甲醇诱导分泌表达.上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到:Q Sepharose FF和Benzamidine-Sepharose 4BCL.与天然蛇毒类凝血酶一致,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱.此重组类凝血酶在37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽,但在0℃下很稳定.该酶的最适pH为8.0.

其他文献

昆船智能: 深厚底蕴铸造辉煌——专访云南昆船智能装济有限公司总经理姜荣奇

近年来,AGV自动导引搬运车已经从之前的前沿技术真正地飞入寻常百姓家,我们在许多产品解决方案中都能看到AGV的身影.作为国内最早开始研发AGV的企业,昆船智能有着20余年的创

期刊

林下植被对遥感估算马尾松LAI的影响

叶面积指数是一项极其重要的描述植被冠层结构的植被特征参量。根据植被物候规律,利用中国环境卫星CCD多光谱影像和野外马尾松样区调查数据,通过建立不同季节和不同郁闭度样区马尾松LAI和影像NDVI经验回归模型,并利用一个新的LAI观测方式定量比较乔木层LAI和生态系统总LAI(包括草本层、灌木层和乔木层)的差异,研究林下植被对马尾松反演的影响程度。结果表明:(1)由于林下植被的物候变化,冬季林下植被对

期刊

林下植被马尾松叶面积指数(LAI)遥感郁闭度物候期不确定性

探讨分析化学检测中的安全管理

在化学检测领域,安全管理是保障整个活动过程的重要因素.安全管理的目的是什么,以及怎样对化学检测过程及场所进行有效的安全管理是本文研究的重点.研究者以化学检测实验室为

期刊

化学检测实验室安全管理

企业标准实施应用现状及对策分析

结合企业标准宣贯工作和企业标准应用调查结果,对企业标准应用率不高的情况进行了研究分析,提出了推进企业标准实施应用的对策建议.

期刊

企业标准实施现状应用对策建议

保险合同专业术语研究

专业术语是指特定领域对一些特定事物的统一的业内称谓,是沟通交流的标准语言和通用语言,主要解决因缺乏术语标准引起的歧义和误解问题.专业术语运用于各行各业,在国际惯例中