大鼠脑红蛋白(NGB)的原核表达、抗体制备及其细胞分布

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bjkhs
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脑红蛋白(NGB)是新发现的与脑内氧供应密切相关的分子.为了检测细胞内脑红蛋白的表达、亚细胞分布从而对该分子进行深入的功能研究,成功地将大鼠脑红蛋白基因编码区构建于原核表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得融合表达产物.对含有融合蛋白的包含体进行溶解和复性,用谷胱甘肽S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化,通过免疫家兔获得了兔源性抗NGB多克隆抗体.采用Westem印迹分析技术,用该抗体检测NGB基因的真核表达产物,证明该抗体有较好的针时NGB蛋白的专一性,可用于对NGB的结构和功能研究.同时,用该抗体进行免疫组化分析发现,正常成年大鼠神经系统中有较多的NGB免疫反应阳性细胞分布,提示NGB是与神经系统功能密切相关的重要分子.
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