【摘 要】
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目的 观察沉默低氧诱导因子1α(HIF-1a)基因后对胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及转移能力的影响.方法 实验分3组,干扰组(转染表达HIF-1α-shRNA的质粒)、对照干扰组(转染阴性对照shRNA序列)及未处理组.干扰组利用前期构建的HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)沉默HIF-1α基因,构建HIF-1α-shRNA慢病毒表达载体,在脂质体介导下转染人胶质母细胞瘤细胞U87.采
【机 构】
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361003,厦门,厦门大学附属第一医院神经外科,361003,厦门,厦门大学附属第一医院神经外科,361003,厦门,厦门大学附属第一医院神经外科
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目的 观察沉默低氧诱导因子1α(HIF-1a)基因后对胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及转移能力的影响.方法 实验分3组,干扰组(转染表达HIF-1α-shRNA的质粒)、对照干扰组(转染阴性对照shRNA序列)及未处理组.干扰组利用前期构建的HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)沉默HIF-1α基因,构建HIF-1α-shRNA慢病毒表达载体,在脂质体介导下转染人胶质母细胞瘤细胞U87.采用RT-PCR和Western blotting检测HIF-1α基因干扰效率,MTT法检测细胞生长增殖能力,迁移实验检测细胞的体外迁移能力,Transwell小室模型检测细胞的体外侵袭及转移能力.结果 RT-PCR和Western blotting实验证实,与对照干扰组及未处理组比较,干扰组细胞HIF-1αmRNA表达水平明显下降,蛋白条带明显减弱.MTT细胞增殖实验显示,干扰组细胞增殖水平较其他2组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell小室侵袭实验中,未处理组、对照干扰组、干扰组穿膜细胞数分别为(125.2±10.8)个、(118.3±8.3)个、(60.9±5.4)个,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α-shRNA能有效抑制U87细胞株HIF-1α mRNA及蛋白的表达,并能抑制U87细胞的增殖、侵袭及转移能力。
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