【摘 要】
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目的 观察脂多糖(LPS)对正常结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化的影响,探索miR-125和SMAD4在细胞转化过程中的作用和机制.方法 以人正常结肠上皮细胞系HCoEpiCs为研究对象,用CCK-8法探索LPS的最佳刺激浓度;用LPS连续刺激HCoEpiCs细胞40代并检测细胞周期相关基因cyclinD1、癌基因c-myc、抗凋亡基因Bcl-2、miR-125和TGF-β信号通路下游效应分子SMAD4的表达,平板克隆和软琼脂集落实验形成情况以确定细胞恶转情况;观察转染miR-125 mimic和inhibit
【机 构】
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郑州市第七人民医院 普外科,河南 郑州450000;河南中医药大学第一附属医院 普外科,河南 郑州450000
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目的 观察脂多糖(LPS)对正常结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化的影响,探索miR-125和SMAD4在细胞转化过程中的作用和机制.方法 以人正常结肠上皮细胞系HCoEpiCs为研究对象,用CCK-8法探索LPS的最佳刺激浓度;用LPS连续刺激HCoEpiCs细胞40代并检测细胞周期相关基因cyclinD1、癌基因c-myc、抗凋亡基因Bcl-2、miR-125和TGF-β信号通路下游效应分子SMAD4的表达,平板克隆和软琼脂集落实验形成情况以确定细胞恶转情况;观察转染miR-125 mimic和inhibitor后SMAD4的表达,通过双荧光素酶基因报告实验验证miR-125和SMAD4的靶向关系.结果 LPS刺激浓度为10μg/mL时细胞活力开始出现明显抑制(P<0.05).以该浓度连续刺激40代后HCoEpiCs细胞cyclinD1、c-myc和Bcl-2均出现显著增高(P<0.05),并出现明显的细胞克隆形成现象.发生转化的细胞中miR-125出现明显的升高(P<0.05),而SMAD4出现显著的降低(P<0.05).过表达miR-125后,SMAD4和c-myc的表达均出现明显的降低(P<0.05),SMAD4的野生型3\'-UTR相对荧光素酶活性出现了明显的下降;而SMAD4的3\'-UTR区被突变后,相对荧光素酶活性未出现明显的改变.结论 miR-125可靶向SMAD4抑制LPS诱导的结肠上皮细胞HCoEpiCs向肿瘤细胞转化.
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