【摘 要】
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为探究旋毛虫肌幼虫体内海藻糖酶（TsTRE）和海藻糖在抵抗低温胁迫中的作用，将旋毛虫肌幼虫置于37℃环境中培养1 h后，移至不同温度的环境中，通过qRT-PCR方法筛选出最佳胁迫温度，后在最佳胁迫温度下，应用qRT-PCR和Western-blot方法检测不同培养时间下TsTRE的基因转录水平与蛋白表达水平的变化，用3， 5-二硝基水杨酸法检测TsTRE活性，用蒽酮比色法检测旋毛虫肌幼虫体内海藻糖
【机 构】
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东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（32172883）； 国家寄生虫资源库项目（NPRC-2019-194-30）；
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为探究旋毛虫肌幼虫体内海藻糖酶（TsTRE）和海藻糖在抵抗低温胁迫中的作用，将旋毛虫肌幼虫置于37℃环境中培养1 h后，移至不同温度的环境中，通过qRT-PCR方法筛选出最佳胁迫温度，后在最佳胁迫温度下，应用qRT-PCR和Western-blot方法检测不同培养时间下TsTRE的基因转录水平与蛋白表达水平的变化，用3， 5-二硝基水杨酸法检测TsTRE活性，用蒽酮比色法检测旋毛虫肌幼虫体内海藻糖含量的变化，免疫荧光检测TsTRE在虫体内的分布情况。结果显示，在最佳胁迫温度4℃下，可引起TsTRE基因转录水平、蛋白表达水平和酶活性显著下降，均在1 h时达到最低值，其分别下降约64.96%、68.89%和36.98%（P＜0.01），随着低温胁迫时间的增加，TsTRE基因转录水平和蛋白表达水平整体呈“W”型趋势；而海藻糖含量则与之相反，呈“M”型趋势，在3 h达到最高值（P＜0.01），约是对照组的1.6倍；TsTRE主要分布于旋毛虫肌幼虫全身表皮、中肠、后肠及生殖原基内，且低温处理组较对照组诱导的绿色荧光信号明显减弱（P＜0.01）。以上研究揭示，在低温胁迫下，旋毛虫肌幼虫体内TsTRE表达的变化和海藻糖含量的变化呈此消彼长的关系，TsTRE表达水平及其酶活性的降低引起海藻糖迅速积累以保护虫体，本研究为进一步探讨旋毛虫抗低温的分子机制提供了理论参考。
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