【摘 要】
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目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-106b影响喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖的分子机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)法分析miR-106b对Hep-2细胞株增殖的影响;通过实时荧光定量聚合酶链反应
【机 构】
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300190,天津市第一中心医院检验科;300190,天津市第一中心医院耳鼻喉科;
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目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-106b影响喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖的分子机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)法分析miR-106b对Hep-2细胞株增殖的影响;通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和West blot技术检测miR-106b各转染组腺瘤性息肉病基因(APC) mRNA和蛋白表达水平;将APC基因3非翻译区(3UTR)-荧光素酶表达载体及其突变体与miR-106b共转染至Hep-2细胞,采用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶的活性.结果 与miR-106b inhibitor和对照组比较,转染miR-106b-mimics能明显促进Hep-2细胞的增殖;APC蛋白在miR-106b-mimics转染组、对照组和miR-106b inhibitor中的表达水平分别为0.586 ±0.023,0.734 ±0.024和0.927±0.018,3组间差异有统计学意义(P＜0.05);而APC mRNA的表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05);在共转染野生型APC基因3UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性分别为4.37±1.04,8.376±1.23和23.75±1.63,3组间差异有统计学意义(P＜0.05);而在共转染突变型APC基因3UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株中,miR-106b可结合到APC基因3UTR,在转录后水平负性调控APC基因的表达,从而促进Hep-2细胞的增殖.
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