【摘 要】
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目的:研究足细胞裂孔膜分子nephrin调节血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞骨架分布改变的分子机制.方法:用AngⅡ及AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦或Akt抑制剂LY294002刺激足细胞,FITC-
【机 构】
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武汉大学人民医院肾内科,湖北,武汉,430060
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目的:研究足细胞裂孔膜分子nephrin调节血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞骨架分布改变的分子机制.方法:用AngⅡ及AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦或Akt抑制剂LY294002刺激足细胞,FITC-phalloidin染色标记F-actin,分析足细胞骨架运动.Real-time RT-PCR、RT-PCR和Western blotting检测nephrin mRNA和蛋白表达.转染nephrin全长表达质粒(pcDNA3.1-mNPHS1),建立稳定转染足细胞系,Western blotting检测转染细胞的Akt磷酸化水平,FITC-phalloidin染色分析高表达nephrin对F-actin分布影响.结果:AngⅡ和LY294002刺激后,足细胞的F-actin重组,应力纤维减少,形成F-actin外周环.氯沙坦显著抑制F-actin重排.AngⅡ刺激后nephrin mRNA和蛋白表达显著降低,Akt磷酸化水平降低.pcDNA3.1-mNPHS1转染显著上调足细胞Akt磷酸化水平,促进足细胞短线状足突形成,部分抑制AngⅡ诱导的骨架重排.结论:PI3K/Akt是nephrin和AngⅡ的共同下游通路.Nephrin能通过PI3K/Akt途径部分稳定AngⅡ诱导的足细胞细胞骨架改变.
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