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【摘要】 目的：检测CCR5在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况，探讨其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法联合检测100例NSCLC和16例癌旁组织中CCR5的表达。结果：CCR5在NSCLC中的表达阳性率显著高于癌旁组织（71% vs 25%，p<0.05），在有淋巴结转移的肺癌组织的表达高于无淋巴结转移的肺癌组织的表达（89.3% vs 47.7%，p<0.05），且与NSCLC的TNM分期相关（P＜0.05）。结论：CCR5在NSCLC中有过表达现象，过表达CCR5可作为反映NSCLC细胞转移能力和临床分期的参考指标之一。
肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，占恶性肿瘤死亡的第一位，而NSCLC约占肺癌70%～80%。复发和转移是NSCLC患者死亡的根本原因。趋化因子受体及配体是由小分子分泌蛋白组成测细胞因子超家族成员，近来许多研究发现一些趋化因子受体及其配体与肿瘤的侵袭和转移密切相关[1-3]。
我们应用免疫组化法对组织学分级、临床分期、淋巴结转移等程度不同的100例非小细胞肺癌组织进行趋化因子受体5（CCR5）的检测，研究其在NSCLC中的表达，并探讨其与NSCLC生物学行为的关系。
1材料与方法
1.1组织标本
100例NSCLC患者组织标本来自烟台山医院2000年1月~2006年12月手术切除存档蜡块。所选患者术前均未接受过放射治疗、化学治疗或靶向治疗等。其中男68例，女32例，年龄范围38~81岁，平均年龄60.4±9.7岁。根据WHO (1981年)肺癌的分类方法进行组织学分类，标本中80例为鳞癌，20例为腺癌；并以癌旁正常肺组织16例做对照；有淋巴结转移56例、无淋巴结转移44例。肿瘤最大径>3cm的38例，≤3cm的62例。所有病例经病理复诊并按国际抗癌联盟(UICC)1997年修订的TNM分期标准分为I期16例、II期32、III期34例、Ⅳ期18例。
1.2方法
免疫组化染色：组织块按常规用10%甲醛固定、石蜡包埋，3μｍ连续切片。采用Envision二步法分别检测CCR5表达情况。染色方法按试剂盒说明书步骤进行。PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3结果判定
CCR5定位于细胞膜或部分细胞质，阳性细胞胞膜或胞浆内出现棕黄色或棕褐色颗粒，表达结果判断：切片内阳性染色细胞率≥20％为CCR5表达阳性(+)；如切片内阳性表达率<20％，或无染色细胞均为阴性表达(-)。
1.4统计学处理
用SPSS13.0统计软件进行统计，采用χ2检验和t检验。
2结果
2.1非小细胞肺癌组织中CCR5的表达及与NSCLC生物学特征的关系100例NSCLC患者中CCR5表达阳性者71例，总阳性表达率71.0%。其中肺癌组织CCR5阳性表达率明显高于癌旁组织；CCR5阳性表达率在临床分期Ⅲ+Ⅳ期明显高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期；有淋巴结转移者CCR5阳性表达率明显高于无淋巴结转移者。CCR5的阳性表达与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织分化程度、组织学类型之间无明显相关性。详见图1，表1。
图1 CCR5 在NSCLC中的表达（×10）
表1 CCR5 与NSCLC生物学特征的关系
3讨论
趋化因子（CK）是一类具有趋化活性的小分子细胞因子，它的功能在于使细胞表面具有跨膜G蛋白偶联受体的细胞聚集在一起，参与体内的免疫平衡作用。目前已鉴定的趋化因子受体至少有20种[4]。
CCR5是细胞内β2趋化因子MIP-1α、MIP-1β、RANTES 结合的受体，具有调控T细胞和单核细胞／巨嗜细胞系的迁移、增殖与免疫的功能[5]。Th1 细胞选择性的表达CXCR3和 CCR5，在CCR5 和它的配体CCL3调解下，树突状细胞和T细胞向肿瘤内聚集，从而发挥相应的作用[6、7]。
有报道发现CCR5在多种肿瘤细胞中表达，且与乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤的生长、转移有密切关系[8、9]。Vaday GG等在前列腺癌中研究发现，CCL5可以促进前列腺癌细胞的生长和侵袭，而CCR5拮抗剂TAK-779则可阻断其增殖和侵袭。CCL5/CCR5还可以通过增加MMP-9产生促进口腔癌细胞的侵袭[10、11]。
虽然许多研究证实趋化因子受体及配体影响转移，但具体机制尚存在争议。Zimmermann T等在结肠癌中研究则得出相反的结论，通过RT-PCR研究了103例结肠癌患者CCR5的表达，结果发现CCR5表达弱阳性和阴性的患者与肿瘤的UICC 分期和淋巴结转移明显相关[12]。而孟凡云等检测乳腺癌组织CCR5的表达情况，分析其与c-erbB2和淋巴结转移的关系，发现CCR5与淋巴结转移和c-erbB表达成正相关[13]。本研究发现，CCR5在肺癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织，发生淋巴结转移者CCR5阳性表达率高于无淋巴结转移者，临床分期Ⅲ+Ⅳ期者CCR5阳性表达率高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期者，提示CCR5在不同肿瘤组织中的表达各不相同，其表达量与肿瘤的生物学行为存在一定关系，在肺癌组织中有较高表达，并且可能与肺癌的转移密切相关。
综上，CCR5在NSCLC的发生发展及淋巴结转移方面起到一定作用，或许可作为预测淋巴结转移和肺癌预后的重要分子标记物，为NSCLC的临床治疗提供了新靶点。
参考文献
[1]Vicari AP, Caux C. Chemokines in cancer. Cytokine Growth Factor Rev. 2002.
[2]韩燕星, 蒋建东.CCR5:抗HIV-1药物的新靶点.中国医学科学院学报, 2003.
[3]孟凡云，章阳，张利宁等. 乳腺癌组织CCR5和c-erbB-2表达与腋窝淋巴结转移的相关性研究. 中华肿瘤防治杂志,2009.
肺癌是目前最常见的恶性肿瘤之一，占恶性肿瘤死亡的第一位，而NSCLC约占肺癌70%～80%。复发和转移是NSCLC患者死亡的根本原因。趋化因子受体及配体是由小分子分泌蛋白组成测细胞因子超家族成员，近来许多研究发现一些趋化因子受体及其配体与肿瘤的侵袭和转移密切相关[1-3]。
我们应用免疫组化法对组织学分级、临床分期、淋巴结转移等程度不同的100例非小细胞肺癌组织进行趋化因子受体5（CCR5）的检测，研究其在NSCLC中的表达，并探讨其与NSCLC生物学行为的关系。
1材料与方法
1.1组织标本
100例NSCLC患者组织标本来自烟台山医院2000年1月~2006年12月手术切除存档蜡块。所选患者术前均未接受过放射治疗、化学治疗或靶向治疗等。其中男68例，女32例，年龄范围38~81岁，平均年龄60.4±9.7岁。根据WHO (1981年)肺癌的分类方法进行组织学分类，标本中80例为鳞癌，20例为腺癌；并以癌旁正常肺组织16例做对照；有淋巴结转移56例、无淋巴结转移44例。肿瘤最大径>3cm的38例，≤3cm的62例。所有病例经病理复诊并按国际抗癌联盟(UICC)1997年修订的TNM分期标准分为I期16例、II期32、III期34例、Ⅳ期18例。
1.2方法
免疫组化染色：组织块按常规用10%甲醛固定、石蜡包埋，3μｍ连续切片。采用Envision二步法分别检测CCR5表达情况。染色方法按试剂盒说明书步骤进行。PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3结果判定
CCR5定位于细胞膜或部分细胞质，阳性细胞胞膜或胞浆内出现棕黄色或棕褐色颗粒，表达结果判断：切片内阳性染色细胞率≥20％为CCR5表达阳性(+)；如切片内阳性表达率<20％，或无染色细胞均为阴性表达(-)。
1.4统计学处理
用SPSS13.0统计软件进行统计，采用χ2检验和t检验。
2结果
2.1非小细胞肺癌组织中CCR5的表达及与NSCLC生物学特征的关系100例NSCLC患者中CCR5表达阳性者71例，总阳性表达率71.0%。其中肺癌组织CCR5阳性表达率明显高于癌旁组织；CCR5阳性表达率在临床分期Ⅲ+Ⅳ期明显高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期；有淋巴结转移者CCR5阳性表达率明显高于无淋巴结转移者。CCR5的阳性表达与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织分化程度、组织学类型之间无明显相关性。详见图1，表1。
图1 CCR5 在NSCLC中的表达（×10）
表1 CCR5 与NSCLC生物学特征的关系
3讨论
趋化因子（CK）是一类具有趋化活性的小分子细胞因子，它的功能在于使细胞表面具有跨膜G蛋白偶联受体的细胞聚集在一起，参与体内的免疫平衡作用。目前已鉴定的趋化因子受体至少有20种[4]。
CCR5是细胞内β2趋化因子MIP-1α、MIP-1β、RANTES 结合的受体，具有调控T细胞和单核细胞／巨嗜细胞系的迁移、增殖与免疫的功能[5]。Th1 细胞选择性的表达CXCR3和 CCR5，在CCR5 和它的配体CCL3调解下，树突状细胞和T细胞向肿瘤内聚集，从而发挥相应的作用[6、7]。
有报道发现CCR5在多种肿瘤细胞中表达，且与乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤的生长、转移有密切关系[8、9]。Vaday GG等在前列腺癌中研究发现，CCL5可以促进前列腺癌细胞的生长和侵袭，而CCR5拮抗剂TAK-779则可阻断其增殖和侵袭。CCL5/CCR5还可以通过增加MMP-9产生促进口腔癌细胞的侵袭[10、11]。
虽然许多研究证实趋化因子受体及配体影响转移，但具体机制尚存在争议。Zimmermann T等在结肠癌中研究则得出相反的结论，通过RT-PCR研究了103例结肠癌患者CCR5的表达，结果发现CCR5表达弱阳性和阴性的患者与肿瘤的UICC 分期和淋巴结转移明显相关[12]。而孟凡云等检测乳腺癌组织CCR5的表达情况，分析其与c-erbB2和淋巴结转移的关系，发现CCR5与淋巴结转移和c-erbB表达成正相关[13]。本研究发现，CCR5在肺癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁组织，发生淋巴结转移者CCR5阳性表达率高于无淋巴结转移者，临床分期Ⅲ+Ⅳ期者CCR5阳性表达率高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期者，提示CCR5在不同肿瘤组织中的表达各不相同，其表达量与肿瘤的生物学行为存在一定关系，在肺癌组织中有较高表达，并且可能与肺癌的转移密切相关。
综上，CCR5在NSCLC的发生发展及淋巴结转移方面起到一定作用，或许可作为预测淋巴结转移和肺癌预后的重要分子标记物，为NSCLC的临床治疗提供了新靶点。
参考文献
[1]Vicari AP, Caux C. Chemokines in cancer. Cytokine Growth Factor Rev. 2002.
[2]韩燕星, 蒋建东.CCR5:抗HIV-1药物的新靶点.中国医学科学院学报, 2003.
[3]孟凡云，章阳，张利宁等. 乳腺癌组织CCR5和c-erbB-2表达与腋窝淋巴结转移的相关性研究. 中华肿瘤防治杂志,2009.