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目的通过建立小鼠幼年铅暴露时间序列及白藜芦醇干预模型,以AMPK/mTOR作为自噬通路研究起点,探索生命早期铅暴露对小鼠脑组织自噬发展及BACE1、p-Tau蛋白表达量改变的影响。方法建立小鼠铅暴露时间序列模型,即4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为6组,实验组以自由饮水方式进行0.2%的醋酸铅溶液染毒3个月后饲养至不同生命节点(4月龄-4Pb、13月龄-13Pb及16月龄-16Pb);同龄对照组仅饮用去离子水(4月龄-4C、13月龄-13C及16月龄-16C)。同时,建立小鼠白藜芦醇(resveratrol,Res)干预模型,4周龄雄性C57BL/6小鼠饮水染铅3个月后,进行12个月隔天Res灌胃,分为对照组(Cont),染铅组(Pb),染铅后Res干预组(PbR)和 Res 组(CR)。对小鼠断头后剥离脑组织,分离皮层及海马区,并进行组织蛋白及mRNA提取。采用Western blotting检测自噬通路因子中自噬诱导因子(AMPK、mTOR、Rictor、GβL)、自噬体成熟辅助因子(Beclin-1、Atg12、Atg3、Atg7)、自噬降解标志因子(LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62)、学习记忆损伤相关因子(p-Tau、BACE1)的相对表达;Real-time PCR 检测 AMPK、mTOR、Beclin-1、Atg12、LC3a、BACE1等基因的mRNA表达水平。结果1.小鼠海马及皮层组织铅暴露时间序列中蛋白表达变化趋势:4月龄、13月龄(P<0.001)及16月龄(P<0.01)染铅组小鼠海马区和13月龄及16月龄(P均小于0.001)染铅组小鼠皮层区p-AMPK/AMPK蛋白相对比均低于同龄对照组;13月龄及16月龄染铅组小鼠海马区(P均小于0.001)和13月龄及16月龄(P<0.05及P<0.01)染铅组小鼠皮层区p-mTOR/mTOR蛋白相对比低于同龄对照组。各年龄染铅组小鼠海马区和皮层区Beclin-1蛋白表达量高于同龄对照组(P<0.05和P<0.001);各年龄染铅组小鼠海马区(P<0.05)和13月龄、16月龄(P均小于0.001)染铅组小鼠皮层区Atg12蛋白表达量高于同龄对照组。各年龄染铅组小鼠海马区(P<0.05)LC31I/LC31蛋白相对比高于同龄对照组;13月龄、16月龄染铅组小鼠海马区和4月龄、16月龄染铅组小鼠皮层区p62蛋白表达量高于同龄对照组(P均小于0.05)。13月龄及16月龄(P<0.001及P<0.01)染铅组小鼠海马区和13月龄、16月龄(P<0.01、P<0.001)染铅组小鼠皮层区BACE1蛋白相对表达量高于同龄对照组;13月龄及16月龄(P均小于0.001)染铅组小鼠海马区和4月龄及13月龄(P均小于0.05)染铅组小鼠皮层区p-Tau蛋白表达量高于同龄对照组。2.白藜芦醇干预对铅暴露小鼠中海马及皮层组织自噬调节因子及BACE1、p-Tau蛋白表达的影响:与Pb组相比,PbR组小鼠皮层区p-AMPK/AMPK蛋白相对比降低(P<0.05)。与Pb组相比,PbR组小鼠海马区中Beclin-1、BACE1、p-Tau蛋白表达量明显降低(P<0.05、P<0.001、P<0.05),PbR组小鼠皮层区中 Beclin-1、BACE1、p-Tau 蛋白表达量明显降低(P<0.001、P<0.001、P<0.05)。与Pb组相比,PbR组小鼠海马及皮层区中p62蛋白表达量明显降低(P<0.001及 P<0.05)。3.小鼠海马及皮层铅暴露时间序列中mRNA表达变化趋势:染铅组表达量低于对照组可见于16月龄小鼠海马及皮层的AMPK mRNA(P<0.05)、皮层13月龄及16月龄小鼠皮层区的mTORmRNA(P<0.05);染铅组表达量高于对照组可见于13月龄小鼠海马区的Beclin-1 mRNA(P<0.001)、4月龄和13月龄小鼠海马及13月龄组小鼠皮层区的Atg12 mRNA(P<0.05和P<0.01及P<0.05)、16月龄小鼠海马及皮层区的LC3amRNA(P<0.05)、各月龄小鼠海马区的BACE1mRNA(P<0.05)。4.白藜芦醇干预对铅暴露小鼠中海马及皮层组织自噬调节因子及BACE1 mRNA表达的影响:与Pb组相比,PbR组小鼠海马区的Beclin-1、LC3amRNA降低(P<0.05)。与Pb组相比,PbR组小鼠皮层区的AMPKmRNA明显升高(P<0.001);PbR 组小鼠皮层区 Atg12、LC3amRNA减少(P<0.01)。结论1.生命早期铅暴露可促进老龄小鼠脑组织中自噬起始及形成相关因子的表达、抑制自噬降解底物蛋白p62水平,并上调BACE1、p-Tau蛋白表达,提示铅暴露可诱导小鼠脑组织自噬体成熟、抑制神经元自噬降解,引起自噬体滞留及神经功能损伤。2.白藜芦醇干预可通过抑制神经元内自噬体形成、促进自噬降解,同时下调BACE1、p-Tau蛋白表达,进而发挥神经保护作用。