【摘 要】
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目的 建立一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞 (Mesenchymalstemcells,MSCs)的方法 ,为MSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。方法用密度梯度离心结合贴壁培养
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目的 建立一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞 (Mesenchymalstemcells,MSCs)的方法 ,为MSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。方法用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,筛选合适培养基及适宜血清含量 ,传代扩增 ,测定生长曲线和贴壁率 ,形态学观察 ,免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原和细胞基质蛋白属性。结果MSCs属骨髓中的单个核细胞 ,密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,MSCs在含 10 %小牛血清的L DMEM培养液中生长性状相对稳定 ,1、3、5代细胞生长曲线、贴壁率基本相同 ,增殖速度快 ,群体倍增时间约为 3 4小时 ,贴壁存活率高 ,适应性强 ,传代后 12小时贴壁率达 89%。细胞呈均一的成纤维细胞样 ,表达CD44、CD5 4、纤维粘连蛋白 (Fibronectin ,FN)、Ⅰ型胶原 (CollagenI)。结论 密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,在含 10 %小牛血清的L DMEM培养液中 ,细胞稳定扩增
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