【摘 要】
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目的 构建针对肿瘤凋亡基因FasL的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究RNA干扰技术对人肺腺癌A549细胞FasL mRNA表达的抑制作用,探索Fas/FasI途径在肺癌转移中的作用机制.方法 依据siRNA靶序列的设计原则,以FasL mRNA为靶基因,合成2对编码短发夹结构的两条DNA序列,经退火合成DNA双链,再克隆至siRNA表达质粒pSilencer2.0中,转化后进行PCR鉴定和
【机 构】
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450052,郑州大学第一附属医院呼吸内科,450052,郑州大学第一附属医院呼吸内科,450052,郑州大学第一附属医院呼吸内科,450052,郑州大学第一附属医院呼吸内科
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目的 构建针对肿瘤凋亡基因FasL的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,研究RNA干扰技术对人肺腺癌A549细胞FasL mRNA表达的抑制作用,探索Fas/FasI途径在肺癌转移中的作用机制.方法 依据siRNA靶序列的设计原则,以FasL mRNA为靶基因,合成2对编码短发夹结构的两条DNA序列,经退火合成DNA双链,再克隆至siRNA表达质粒pSilencer2.0中,转化后进行PCR鉴定和DNA序列测定.用脂质体介导转染入人肺腺癌A549细胞株,采用实时荧光定量PCR检测细胞FasL mRNA水平的变化.结果 成功构建发卡样FasL siRNA真核表达载体,转染人肺腺癌A549细胞后,FasL mRNA的表达水平显著下降.结论 成功构建的FasL基因siRNA真核表达载体pSi2.0-FasL能显著抑制人肺腺癌A549细胞FasL mRNA的表达。
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