【摘 要】
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目的 构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒.方法 选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针
【机 构】
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广州医学院基础学院生化教研室,中山大学中山医学院生化教研室,广州中医药大学基础学院生理教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金资助项目;广东省医学科学研究基金;广州医学院博士基金
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目的 构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒.方法 选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中,EcoR I和Apa I进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平.结果 双酶切证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒,DNA 测序证实插入的序列正确; FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功; Western blotting结果 显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调.结论 成功构建人FasL基因RNAi质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体.
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