【摘 要】
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目的 比较切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析3种方法纯化包涵体重组蛋白的效果.方法 筛选全长IL-1β与全长IL-1Ra重组质粒(简称IL-1β-1Ra-2重组质粒)及全长IL-1Ra重组质粒的
【机 构】
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吉林大学人兽共患病研究教育部重点实验室/动物医学学院/人兽共患病研究所,吉林长春130062;吉林大学人兽共患病研究教育部重点实验室/动物医学学院/人兽共患病研究所,吉林长春130062;辽宁省盘锦检
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目的 比较切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析3种方法纯化包涵体重组蛋白的效果.方法 筛选全长IL-1β与全长IL-1Ra重组质粒(简称IL-1β-1Ra-2重组质粒)及全长IL-1Ra重组质粒的转化感受态菌株[感受态E.coli BL21(DE3)、E.coli BL21(DE3)PLysS 及E.coli BL21-Codon Plus(DE3)-RIPL]、IPTG 诱导浓度(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mmol/L)、诱导温度(16和37℃).最佳表达条件诱导的IL-1β-1Ra-2重组质粒,分别用切胶、包涵体复性及Ni-NTA亲和层析法进行纯化,确定最佳纯化方法.采用最佳表达条件分别诱导表达IL-1β-1Ra-2重组质粒及全长IL-1Ra重组质粒后,通过最佳纯化方法进行纯化,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 IL-1β-1Ra-2重组质粒及全长IL-1Ra重组质粒最佳转化感受态菌株为E.coli BL21-Codon Plus(DE3)-RIPL,最佳IPTG浓度分别为1和0.4 mmol/L,诱导温度为37℃;最佳纯化方法为包涵体复性纯化法.IL-1β-1Ra-2及全长IL-1Ra重组蛋白包涵体复性纯化产物相对分子质量分别约为10 560和19 770,纯度可达90％以上,可溶性蛋白回收量分别约为46及63 mg,且均可与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合.结论 相同条件下,包涵体复性纯化法获得的可溶性蛋白回收量最大,适用于相对分子质量约10 000的非高表达包涵体蛋白的纯化.
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