【摘 要】
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目的:探讨RNA干扰技术沉默Ras homolgyC(RhoC)对卵巢癌细胞SKOV3细胞运动和侵袭力的影响。方法:利用Invitrogenis RNAi Designer软件设计并构建RhoC的干扰RNA(miRNA)载体,利
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目的:探讨RNA干扰技术沉默Ras homolgyC(RhoC)对卵巢癌细胞SKOV3细胞运动和侵袭力的影响。方法:利用Invitrogenis RNAi Designer软件设计并构建RhoC的干扰RNA(miRNA)载体,利用质脂体介导法将RhoC miRNA及非特异miRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,经blasticdin进行稳定筛选出抗性克隆;将实验分为RhoC miRNA组(转染特异miRNA)、非特异miRNA组(转染非特异性miRNA)、空白对照组(不转染RhoC miRNA)。Western blot检测3组卵巢癌细胞中RhoC蛋白表达水平;同时检测对卵巢癌细胞体外运动及侵袭的抑制作用。结果:SKOV3细胞稳定转染后,转染特异性miRNA组RhoC蛋白表达量[0.1989(4257/21498)]与转染非特异miRNA组[2.142(38245/17855)]和空白对照组[2.604(48872/18768)]相比,差异均有统计学意义(P<0.01),而非特异性组与空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);体外细胞运动实验表明,转染特异性miRNA组与转染非特异性miRNA组及空白对照组跨膜细胞数[分别为(52±3)个、(401±28)个及(432±28)个/高位镜(×200)]比较,差异均有统计学意义(P<0.01),而转染非特异性miRNA组与空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,以上3组穿透基底膜细胞数[分别为(48±9)个、(386±26)个及(424±25)个/高位镜(×200)]比较,差异均有统计学意义(P<0.01),而后两组之间无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制卵巢癌SKOV3细胞RhoC蛋白的表达对卵巢癌细胞的运动及侵袭有抑制作用,这可能为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点。
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