TNF_α基因在鱼腥藻7120中的表达及其产物的亲和层析纯化

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用转入TNF_α基因并稳定表达了4年多的丝状体蓝藻——鱼腥藻7120 (Anabaena sp. PCC 7120),研究比较了在培养液中氮源(NaNO3)和碳源(NaAc)对转基因藻生长和TNF_α基因的不同影响。氮源能稳定外源蛋白的表达,而碳源则影响细胞壁的合成。通过比较几种不同的破碎细胞的方法, 发现超声破碎得到的可溶性总蛋白含量和TNF_α含量均要比冻融法高出1倍左右,经过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、常压离子交换液相层析后,除去杂蛋白及大量容易堵柱的糖类等物质,最后通过亲和柱层析,分离出了纯的目标蛋白——重组肿瘤坏死因子(TNF_α)。经凝胶电泳鉴定为单一的谱带,分子量为17 kD。
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