【摘 要】
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目的 探讨LncRNA-MALAT1(MALAT1)通过调控miR-106b-5p介导结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药分子机制.方法 收集2016-03-17-2019-04-10就诊于南华大学附属南华医院资料完整的
【机 构】
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南华大学附属南华医院肿瘤内科,湖南 衡阳 421002;南华大学附属南华医院肝胆外科,湖南 衡阳 421002;南华大学衡阳医学院基础实验中心,湖南 衡阳 421002
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目的 探讨LncRNA-MALAT1(MALAT1)通过调控miR-106b-5p介导结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药分子机制.方法 收集2016-03-17-2019-04-10就诊于南华大学附属南华医院资料完整的30例5-FU化疗敏感和30例5-FU化疗耐药的结直肠癌患者癌组织.采用5-FU诱导结直肠癌细胞HCT116产生耐药性细胞HCT116/5-FU,将HCT116/5-FU细胞分为空白对照组(Control)、siRNA阴性对照组(siRNA-NC)、MALAT1 siRNA干扰组(si-MALAT1)、si-MALAT1+inhibitor-NC组和si-MALAT1+miR-106b-5p inhibitor组.采用不同浓度(0、5、10、20 mg/L)5-FU处理细胞48 h,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测结直肠癌组织或细胞中MALAT1和miR-106b-5p表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测MALAT1、miR-106b-5p和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的靶向关系.采用SPSS 21.0进行数据分析,多组间比较采用单因素方差分析或两因素方差分析,两两多重比较采用LSD-t检验.结果 (1)临床标本测定:5-FU耐药结直肠癌组织中MALAT1表达量为7.57±1.76,高于5-FU敏感结直肠癌组织(3.15±1.13),t=11.541,P<0.001;而miRNA-106b-5p表达量为8.59±2.32,低于5-FU敏感结直肠癌组织(11.57±2.97),t=4.329,P<0.001.(2)体外细胞实验:0、5、10、20 mg/L 5-FU处理48 h后,HCT116/5-FU细胞在450 nm波长处光密度值D(450 nm)高于HCT116细胞,差异有统计学意义,F组别=93.335,F浓度=48.983,F组别×浓度=11.848,均P<0.001.HCT116/5-FU细胞中MALAT1表达量高于HCT116细胞(t=12.883,P<0.001),miRNA-106b-5p表达量低于HCT116细胞,t=8.101,P<0.001;si-MALAT1组HCT116/5-FU细胞中MALAT1表达量为0.04±0.01,低于Control组(1.01±0.07)和si-NC组(0.99±0.02),F=397.841,P<0.001;0、5、10、20 mg/L 5-FU处理48 h后,si-MALAT1组HCT116/5-FU细胞增殖率低于Control组和si-NC组,差异有统计学意义,F组别=263.160,F浓度=180.634,F组别×浓度=33.675,均P<0.001.si-MALAT1组HCT116/5-FU细胞中miRNA-106b-5p表达量为8.33±0.76,高于Control组(1.10±0.30)和si-NC组(1.00±0.15),F=228.724,P<0.001;0、5、10、20 mg/L 5-FU处理48 h后,si-MALAT1+inhibitor组HCT116/5-FU细胞增殖率高于si-MALAT1组,差异有统计学意义,F组别=164.881,F浓度=361.263,F组别×浓度=19.318,均P<0.001;双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-106b-5p mimics能降低MALAT1和HIF-1α野生型细胞荧光素酶活性,t值分别为11.961和25.390,均P<0.001.结论 MALAT1可能靶向调控miR-106b-5p/HIF-1α表达,进而促进结直肠癌细胞对5-FU耐药.
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