【摘 要】
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利用RT-PCR克隆出共刺激分子人B7(CD80)的全部编码cDNA,将其插入E1区替代的腺病毒载体pAxlcw,选择左向转录的CD80重组腺病毒载体pAxlcw.CIhCD80,与经EcoT221酶切的Ad5腺病毒D
【机 构】
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第二军医大学免疫学教研室,第二军医大学免疫学教研室,日本癌研究会肿瘤研究所 上海200433,上海200433
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利用RT-PCR克隆出共刺激分子人B7(CD80)的全部编码cDNA,将其插入E1区替代的腺病毒载体pAxlcw,选择左向转录的CD80重组腺病毒载体pAxlcw.CIhCD80,与经EcoT221酶切的Ad5腺病毒DNA-末端肽复合物共转染293细胞,通过同源重组获得人CD80的复制缺陷性重组腺病毒,扩增到的病毒滴度为4×10~9pfu/ml;重组腺病毒感染Hela细胞,48小时后经流式细胞仪检测表达高水平的CD80,表明所制备的复制缺陷性重组腺病毒能有效表达人CD80.
The full-length cDNA of costimulatory molecule B7 (CD80) was cloned by RT-PCR and inserted into the E1-substituted adenoviral vector pAxlcw. The left-transcribed CD80 recombinant adenoviral vector pAxlcw.CIhCD80 was selected and digested with EcoT221 Ad5 adenovirus DNA-terminal peptide complex was co-transfected into 293 cells and the recombinant defective replication-defective recombinant adenovirus was obtained by homologous recombination. The amplified virus titer was 4 × 10 ~ 9 pfu / ml. Recombinant adenovirus Infection Hela cells, 48 hours after flow cytometry to express high levels of CD80, indicating that the prepared replication-defective recombinant adenovirus can effectively express human CD80.
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