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目的
利用荧光定量逆转录PCR(fluorescent quantitative reverse transcriptase PCR，qPCR)技术，从病毒基因组RNA复制水平研究HAV在2BS细胞中的增殖动态。
方法根据HAV基因组保守区序列设计引物和探针，构建重组HAV质粒作为工作标准品，建立检测HAV的qPCR法，并验证该法的灵敏度、特异性和重复性。同时用HAV病毒液感染2BS细胞，于感染后不同时间收病毒液，应用该方法检测HAV cDNA。
结果该法在重组HAV质粒标准品为2.6×101～2.6×107拷贝/μl时具有良好的扩增曲线，检测灵敏度为2.6×101拷贝/μl DNA质粒。该法可特异性检测HAV cDNA，且重复性良好，实验内和实验间对不同浓度的重组HAV质粒各检测3次获得的域值循环的变异系数分别为0.23%～1.41%和0.34%～4.82%。应用该法检测HAV在2BS细胞中的增殖显示，感染后6 d HAV开始增殖，感染后14～21 d HAV含量达到最高峰，并一直持续到第28天。
结论建立的方法具有良好的灵敏度、特异性和重复性，可用于实时监测甲型肝炎疫苗生产过程中的HAV增殖动态。