【摘 要】
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应用PCR方法,利用3条引物与2个模板,分别采用一步PCR、两步PCR、三步PCR扩增策略,向cre基因内部引入一段内含子序列,以达到基因改造的目的。结果表明,利用一步PCR的策略,难以
【基金项目】
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黑龙江省青年基金资助项目（QC07C46）, 东北农业大学博士启动基金资助项目
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应用PCR方法,利用3条引物与2个模板,分别采用一步PCR、两步PCR、三步PCR扩增策略,向cre基因内部引入一段内含子序列,以达到基因改造的目的。结果表明,利用一步PCR的策略,难以扩增得到目的基因,利用二步PCR的策略,虽然可以得到目的条带,但存在非特异扩增;通过三步PCR的策略,即第一步PCR扩增产物作为第二步扩增反应的引物,进行小循环的单引物扩增,第三步以第二步产物为模板进行双引物扩增的方法,可以高效扩增得到目的条带。说明三步PCR策略为基因改造的理想方法。
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