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摘 要： 该文采用agilent极性19091X-233 HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m× 0.320mm，0.25μm）色谱柱，以外标法测定苏籽中α-亚麻酸含量。正己烷抽提苏籽中的α-亚麻酸，测定经氢氧化钾-甲醇皂化甲酯化后形成的α-亚麻酸甲酯的含量，直接得出苏籽中α-亚麻酸的含量。结果表明，α-亚麻酸甲酯标品的保留时间为22.785 min，α-亚麻酸甲酯的线性检测范围为0.01～10.00mg/mL，r=0.9981，方法回收率为96.1%～102.4%。
关键词：苏籽；α-亚麻酸；α-亚麻酸甲酯；气相色谱法
中图分类号 R286.0 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）22-0116-03
Abstract：α-Linolenate was extracted with n-hexane from perilla seed，and methylified with 0.8 mol/L KOH-methnoal solution.Then content of α-methyl linolenate，which could be translated to the content of α-linolenate，was quantified with gas chromatographyusing agilent 19091X-233 HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m × 0.320mm，0.25μm）.The retention time for α-methyl linolenate was 22.785 min.This method was appicable in a linear range of 0.01-10.00 mg/mL with the correlation coefficient at 0.9981 and the average recovery for α- linolenate at 96.1% ～102.4%.
Key words：Perilla seed；a-linolenic；α-methyl linolenate；Gas chromatography
紫蘇籽，又名苏籽或颖子，含有丰富的脂肪和蛋白质，是迄今为止发现的含有α-亚麻酸最多的植物物种[1-3]，油中α-亚麻酸含量占其总脂肪酸的60%左右[4]。α-亚麻酸为十八碳三烯酸，是大脑和神经活动所必需的脂肪酸，人体自身不能合成，必须由食物供给，可在体内酶的作用下经肝脏的代谢生成EPA（血管清道夫）和DHA（脑黄金），具有显著的药理作用和营养价值，被称为“21世纪绿色营养保健食品”[5-6]。此外，α-亚麻酸还具有抗炎症、抗血栓、抗血凝、抗过敏、抗心率失调、降血脂、改善血管弹性、调节中央神经系统等功能，在医药、保健品、食品等领域有着广阔的应用前景[7]。我们日常饮食中最缺乏必需脂肪酸是α-亚麻酸，我国医学界和营养界专家纷纷呼吁国家立法，国家食品与营养发展战略专家也正积极规划，专项推广补充α-亚麻酸[8]。
气象色谱法因其分离时间短和分离效果好等特点，其应用范围也越来越广[9]。但气相色谱法在测定苏籽中α-亚麻酸含量中相应方法建立的相关报道较少。本研究旨在建立苏籽中α-亚麻酸的气相色谱分析方法，为今后苏籽的进一步研究提供一定的参考价值。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 生苏籽：市售；α-亚麻酸甲酯标准品：科研sigmal2626；正己烷（色谱纯）：科密欧化学试剂有限公司；甲醇（色谱纯）、无水硫酸钠（分析纯）：成都科龙化工试剂厂；乙醚（分析纯）：川东化工；氢氧化钾（分析纯）：艾科试剂。
1.2 仪器与设备 SKG1208型粉碎机：佛山艾特凯奇电气有限公司；New Classic MS型电子天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；SG8200HPT型超声波清洗仪：上海冠特超声仪器有限公司；RE52CS型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂。气象色谱仪：美国安捷伦科技有限公司。
1.3 方法与步骤
1.3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent 19091X-233HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m×0.320mm，0.25μm）。载气为氮气；检测器为氢火焰离子化检测器（FID）；进样口温度为250℃，检测器温度为270℃。氢气：40mL/min；空气：400mL/min；分流比：10∶1；进样量：1μL。恒流进样，流速：1mL/min，平均线速度：21cm/s。升温程序：起始温度90℃，7℃/min到190℃，3℃/min到215℃，保持10min，20℃/min到230℃后运行5min。
1.3.2 溶液的配制 0.8mol/L氢氧化钾-甲醇溶液：电子天平称取0.448g氢氧化钾溶于装有适量甲醇的烧杯中，静置室温后将溶液转移到10mL的容量瓶中，用甲醇定容。
1.3.3 标准品的配制 精确称取α-亚麻酸甲酯标准品 100.00mg，正己烷定容，分别配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.00mg/mL的α-亚麻酸甲酯标准品溶液，置于-20℃的冰箱中备用。
1.3.4 苏籽油脂的甲酯化 氢氧化钾-甲醇酯化法：用移液管吸取0.1mL脂肪酸置于10mL量瓶中，依次加入1mL乙醚-正己烷混合溶液（乙醚∶正己烷=2∶1）和1mL氢氧化钾（0.8mol/L）-甲醇溶液，充分振荡，静置5min后加蒸馏水至刻度，静置分层，吸上清液，加入少量无水硫酸钠干燥过夜后，进行上机检测。
2 结果与分析
2.1 色谱的定性与分离 采用1.3.1节的色谱柱和色谱条件，对苏籽中的α-亚麻酸有很好的分离效果。采用保留时间对照法确定α-亚麻酸甲酯的位置。由图1可见，α-亚麻酸甲酯标准品的保留时间为22.785min，具有良好对称峰型。 2.2 线性范围 分别将0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0mg/mL的α-亚麻酸甲酯标准品溶液，按上述试验条件进样，检测结果见表1，标准曲线见图2所示。由表1可知，在α-亚麻酸甲酯在0.01～10.00mg/mL的质量浓度范围内，色谱峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。由图2可知，α-亚麻酸甲酯在质量浓度为0.01～10.00mg/mL时，r=0.9981，相关性良好。
2.3 精密度 样品经6次连续进样测得的结果分别为 150.4、143.4、144.6、142.5、145.7、145.8mg/g，RSD（相对标准偏差）为2.39%，说明仪器精密度良好。
2.4 加标回收率 分别加入质量浓度为10.00mg/mL的α-亚麻酸甲酯0.1、0.5、1mL于1g苏籽样品（α-亚麻酸含量为15.16mg/g）中，按超声波辅助提取油脂再进行甲酯化处理，最后得到添加质量浓度分别为0.10、0.50、1.00 mg/mL的待测样品，回收率见表2。由表2可知，加标回收率为96.1%～102.4%，回收率平均值为100.1%。说明该法测定苏籽α-亚麻酸含量准确度较高，方法可行。
3 结论
采用气相色谱外标法测定苏籽油中α-亚麻酸含量，α-亚麻酸甲酯的线性检测范围为0.01～10.00mg/mL，r=0.9981，方法平均回收率为100.1%。该法快速、准确、可行，适用于苏籽α-亚麻酸含量的测定。
苏籽油中a-亚麻酸含量测定中，各种测定方法之间进行比较的研究较少，寻找准确、简单、低价、快速测定的方法测定苏籽内a-亚麻酸含量对苏籽的开发利用具有一定的意义。气相色谱法具有分离时间短、分离性好、操作简单实用、检测快速准确、成本低且可行性高等特点，适用于苏籽中α-亚麻酸含量的测定。
参考文献
[1]李峰，徐小洲，付金元，等.紫苏的化学成分及应用价值[J].中国食品工业，2015（3）：70.
[2]秋西.紫苏东方香草的故事[J].植物，2016，2（03）：80-84.
[3]宋明明，姜丽，于大永，等.α-亚麻酸植物资源的筛选[J].农业机械，2012（15）：40-42.
[4]胡晓丹，张德权，杜为民，等.紫苏提取物对紫苏油抗氧化作用的研究[J].食品工业科技，2007，08（28）：118-120.
[5]李麗萍，韩涛.富含α-亚麻酸植物资源的开发与利用[J].食品科学，2007，28（11）：614-618.
[6]刘峰，王正武，王仲妮.α-亚麻酸的分离技术及功能[J].食品与药品，2007，9（8）：60-63.
[7]继成.α-亚麻酸，绿色保健食品[J].中国制药信息，2006，22（10）：14-17.
[8]汪海涛，薄华本，陈业诚，等.GC法同时测定火麻仁油中油酸、亚油酸和α-亚麻酸的含量[J].广东化工，2016，43（7）：177-179.
[9]岳巧云，张静，刘恭源，等.气相色谱法测定干果中的α-亚麻酸[J].食品科学.2009，30（24）：359-361.
[10]王鸿梅，气象色谱内标法测定苏籽油中α-亚麻酸的含量[J].华夏医药，2002：20-21. （责编：张宏民）
关键词：苏籽；α-亚麻酸；α-亚麻酸甲酯；气相色谱法
中图分类号 R286.0 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）22-0116-03
Abstract：α-Linolenate was extracted with n-hexane from perilla seed，and methylified with 0.8 mol/L KOH-methnoal solution.Then content of α-methyl linolenate，which could be translated to the content of α-linolenate，was quantified with gas chromatographyusing agilent 19091X-233 HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m × 0.320mm，0.25μm）.The retention time for α-methyl linolenate was 22.785 min.This method was appicable in a linear range of 0.01-10.00 mg/mL with the correlation coefficient at 0.9981 and the average recovery for α- linolenate at 96.1% ～102.4%.
Key words：Perilla seed；a-linolenic；α-methyl linolenate；Gas chromatography
紫蘇籽，又名苏籽或颖子，含有丰富的脂肪和蛋白质，是迄今为止发现的含有α-亚麻酸最多的植物物种[1-3]，油中α-亚麻酸含量占其总脂肪酸的60%左右[4]。α-亚麻酸为十八碳三烯酸，是大脑和神经活动所必需的脂肪酸，人体自身不能合成，必须由食物供给，可在体内酶的作用下经肝脏的代谢生成EPA（血管清道夫）和DHA（脑黄金），具有显著的药理作用和营养价值，被称为“21世纪绿色营养保健食品”[5-6]。此外，α-亚麻酸还具有抗炎症、抗血栓、抗血凝、抗过敏、抗心率失调、降血脂、改善血管弹性、调节中央神经系统等功能，在医药、保健品、食品等领域有着广阔的应用前景[7]。我们日常饮食中最缺乏必需脂肪酸是α-亚麻酸，我国医学界和营养界专家纷纷呼吁国家立法，国家食品与营养发展战略专家也正积极规划，专项推广补充α-亚麻酸[8]。
气象色谱法因其分离时间短和分离效果好等特点，其应用范围也越来越广[9]。但气相色谱法在测定苏籽中α-亚麻酸含量中相应方法建立的相关报道较少。本研究旨在建立苏籽中α-亚麻酸的气相色谱分析方法，为今后苏籽的进一步研究提供一定的参考价值。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 生苏籽：市售；α-亚麻酸甲酯标准品：科研sigmal2626；正己烷（色谱纯）：科密欧化学试剂有限公司；甲醇（色谱纯）、无水硫酸钠（分析纯）：成都科龙化工试剂厂；乙醚（分析纯）：川东化工；氢氧化钾（分析纯）：艾科试剂。
1.2 仪器与设备 SKG1208型粉碎机：佛山艾特凯奇电气有限公司；New Classic MS型电子天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；SG8200HPT型超声波清洗仪：上海冠特超声仪器有限公司；RE52CS型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂。气象色谱仪：美国安捷伦科技有限公司。
1.3 方法与步骤
1.3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent 19091X-233HP-1 BondedPolyethlene Glycol（30m×0.320mm，0.25μm）。载气为氮气；检测器为氢火焰离子化检测器（FID）；进样口温度为250℃，检测器温度为270℃。氢气：40mL/min；空气：400mL/min；分流比：10∶1；进样量：1μL。恒流进样，流速：1mL/min，平均线速度：21cm/s。升温程序：起始温度90℃，7℃/min到190℃，3℃/min到215℃，保持10min，20℃/min到230℃后运行5min。
1.3.2 溶液的配制 0.8mol/L氢氧化钾-甲醇溶液：电子天平称取0.448g氢氧化钾溶于装有适量甲醇的烧杯中，静置室温后将溶液转移到10mL的容量瓶中，用甲醇定容。
1.3.3 标准品的配制 精确称取α-亚麻酸甲酯标准品 100.00mg，正己烷定容，分别配制0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.00mg/mL的α-亚麻酸甲酯标准品溶液，置于-20℃的冰箱中备用。
1.3.4 苏籽油脂的甲酯化 氢氧化钾-甲醇酯化法：用移液管吸取0.1mL脂肪酸置于10mL量瓶中，依次加入1mL乙醚-正己烷混合溶液（乙醚∶正己烷=2∶1）和1mL氢氧化钾（0.8mol/L）-甲醇溶液，充分振荡，静置5min后加蒸馏水至刻度，静置分层，吸上清液，加入少量无水硫酸钠干燥过夜后，进行上机检测。
2 结果与分析
2.1 色谱的定性与分离 采用1.3.1节的色谱柱和色谱条件，对苏籽中的α-亚麻酸有很好的分离效果。采用保留时间对照法确定α-亚麻酸甲酯的位置。由图1可见，α-亚麻酸甲酯标准品的保留时间为22.785min，具有良好对称峰型。 2.2 线性范围 分别将0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0mg/mL的α-亚麻酸甲酯标准品溶液，按上述试验条件进样，检测结果见表1，标准曲线见图2所示。由表1可知，在α-亚麻酸甲酯在0.01～10.00mg/mL的质量浓度范围内，色谱峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。由图2可知，α-亚麻酸甲酯在质量浓度为0.01～10.00mg/mL时，r=0.9981，相关性良好。
2.3 精密度 样品经6次连续进样测得的结果分别为 150.4、143.4、144.6、142.5、145.7、145.8mg/g，RSD（相对标准偏差）为2.39%，说明仪器精密度良好。
2.4 加标回收率 分别加入质量浓度为10.00mg/mL的α-亚麻酸甲酯0.1、0.5、1mL于1g苏籽样品（α-亚麻酸含量为15.16mg/g）中，按超声波辅助提取油脂再进行甲酯化处理，最后得到添加质量浓度分别为0.10、0.50、1.00 mg/mL的待测样品，回收率见表2。由表2可知，加标回收率为96.1%～102.4%，回收率平均值为100.1%。说明该法测定苏籽α-亚麻酸含量准确度较高，方法可行。
3 结论
采用气相色谱外标法测定苏籽油中α-亚麻酸含量，α-亚麻酸甲酯的线性检测范围为0.01～10.00mg/mL，r=0.9981，方法平均回收率为100.1%。该法快速、准确、可行，适用于苏籽α-亚麻酸含量的测定。
苏籽油中a-亚麻酸含量测定中，各种测定方法之间进行比较的研究较少，寻找准确、简单、低价、快速测定的方法测定苏籽内a-亚麻酸含量对苏籽的开发利用具有一定的意义。气相色谱法具有分离时间短、分离性好、操作简单实用、检测快速准确、成本低且可行性高等特点，适用于苏籽中α-亚麻酸含量的测定。
参考文献
[1]李峰，徐小洲，付金元，等.紫苏的化学成分及应用价值[J].中国食品工业，2015（3）：70.
[2]秋西.紫苏东方香草的故事[J].植物，2016，2（03）：80-84.
[3]宋明明，姜丽，于大永，等.α-亚麻酸植物资源的筛选[J].农业机械，2012（15）：40-42.
[4]胡晓丹，张德权，杜为民，等.紫苏提取物对紫苏油抗氧化作用的研究[J].食品工业科技，2007，08（28）：118-120.
[5]李麗萍，韩涛.富含α-亚麻酸植物资源的开发与利用[J].食品科学，2007，28（11）：614-618.
[6]刘峰，王正武，王仲妮.α-亚麻酸的分离技术及功能[J].食品与药品，2007，9（8）：60-63.
[7]继成.α-亚麻酸，绿色保健食品[J].中国制药信息，2006，22（10）：14-17.
[8]汪海涛，薄华本，陈业诚，等.GC法同时测定火麻仁油中油酸、亚油酸和α-亚麻酸的含量[J].广东化工，2016，43（7）：177-179.
[9]岳巧云，张静，刘恭源，等.气相色谱法测定干果中的α-亚麻酸[J].食品科学.2009，30（24）：359-361.
[10]王鸿梅，气象色谱内标法测定苏籽油中α-亚麻酸的含量[J].华夏医药，2002：20-21. （责编：张宏民）