Smad4真核表达质粒的构建及转染结肠癌细胞系SW480

来源 :广东医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ytg1987

【摘要】

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目的构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系。方法提取正常人体胎盘组织总RNA，PCR扩增人野生型Smad4基因，通过DNA重组技术将该基因片段重组

【作者】

：

田笑笑张亚历付祥胜

【机构】

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南方医科大学南方医院消化内科

【出处】

：

广东医学

【发表日期】

：

2009年3期

【关键词】

：

SMAD4 结肠肿瘤真核表达质粒转染

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目的构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系。方法提取正常人体胎盘组织总RNA，PCR扩增人野生型Smad4基因，通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3．1（＋）真核表达载体上，构建peDNA3．1（＋）-Smad4重组质粒，通过PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定，脂质体介导方法转染结肠癌细胞系SW480，G418筛选稳定表达株，RT—PCR方法检测其mRNA表达水平。结果Smad4基因的PCR电泳结果显示在1700bp左右

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