论文部分内容阅读
目的
应用高分辨率熔解曲线(high resolution melting curve analysis，HRM)和DNA测序的方法对1例瓜氨酸血症1型患儿及其父母进行快速的基因诊断。
方法抽取患儿、患儿父母及100名正常体检者的外周血，采用HRM分析技术针对ASS1基因的16个外显子进行全外显子扫描，并对曲线异常的区域进行DNA测序。随后采用逆转录-PCR对ASS1基因的mRNA进行分析。最后，采用PolyPhen-2和SIFT Blink软件分别对ASS1基因中的突变位点进行同源性和生物学功能分析。
结果血液生化检测结果显示患儿外周血中血氨达到286 μmol/L，超过正常参考值的5倍以上，串联质谱结果显示患儿外周血中瓜氨酸浓度高达487.69 μmol/L，CIT/ARG达148.66，均远高于正常范围。HRM的结果发现在ASS1基因第6外显子和第8外显子的区域(包含部分相邻内含子)中患儿及其父母的HRM曲线与正常对照不一致。DNA测序结果证实，在患儿第6外显子中发生了c.380G>A的纯合突变，该突变会导致ASS1蛋白p.R127Q的改变。而在第8内含子中则发生了IVS8＋60G>A的纯合变异。患儿的父母中这两个位点均为杂合变异。100名正常对照样本中均未检出变异。逆转录-PCR结果表明ASS1基因第8内含子中IVS8＋60G>A的变异不会导致RNA剪接的异常。结构分析结果表明p.R127Q位点在45种脊椎动物中保守性非常高，它是ASS1蛋白中与瓜氨酸结合的位点，对于ASS1蛋白功能的行使非常重要。
结论在中国大陆人群中发现了ASS1基因第6外显子的c.380G>A及第8内含子的IVS8＋60G>A复合纯合突变，其中c.380G>A纯合突变可能是引起患儿尿素循环障碍的致病突变。