【摘 要】
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目的 建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测.方法 根据GenBank公布的香港海鸥形菌16S rR
【机 构】
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肇庆市疾病预防控制中心,广东肇庆,526060
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目的 建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测.方法 根据GenBank公布的香港海鸥形菌16S rRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证.结果 建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40 min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝/反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0.183％.92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌,16S rRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99.5％以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性.结论 本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值.
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