论文部分内容阅读
目的
以尿液脱落细胞为来源，构建先天性马蹄内翻足患者特异的诱导多能干细胞(iPSCs)。
方法收集先天性马蹄内翻足患者尿液180 ml，通过离心，分离出尿液脱落细胞并进行培养，然后使用病毒系统对该细胞进行重编程，获得状态良好的细胞并进行鉴定，鉴定方法包括多能性基因检测、碱性磷酸酶(ALP)染色、核型鉴定、流式细胞仪(FACS)检测表面标志物、拟胚体(EB)悬浮球实验和甲基化检测等多种检测手段。
结果获得的细胞多能性基因表达与人胚胎干细胞H9相似，ALP染色呈强阳性，核型正常，多能性标记Tra-1-60阳性率为84.1%，能形成大量EB悬浮球，细胞在Nanog同源框(NANOG)和有机阳离子/肉毒碱运输蛋白4(Oct4)基因启动子区域的甲基化基本消失，证实获得的细胞具有多能性干细胞的所有特征，确定为iPSCs。
结论本实验成功构建了先天性马蹄内翻足患者特异iPSCs，为明晰先天性马蹄内翻足的演变特征提供了疾病模型。