【摘 要】
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目的：构建高糖应激下人PRKCD基因过表达内皮细胞模型并攀定。方法：设计含Age Ⅰ和Nhe Ⅰ酶切位点的PRKCD基因上下游引物．以含PRKCD基因的原始质粒为模版，PCR扩增获得PRKCD全部序
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院内分泌科,第三军医大学新桥医院内分泌科
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目的：构建高糖应激下人PRKCD基因过表达内皮细胞模型并攀定。方法：设计含Age Ⅰ和Nhe Ⅰ酶切位点的PRKCD基因上下游引物．以含PRKCD基因的原始质粒为模版，PCR扩增获得PRKCD全部序列，经Age Ⅰ和Nhe Ⅰ酶切后与同样酶切后的真核表达载体pDC316-LacZα重组扶得穿梭质粒pDC316-PRKCD，经PCR及酶切、基凶测序整定后，与腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1，3Cre共转染293细胞获得重组腺病毒Ad5-PRKCD，行PCR鉴定并反复纯化扩增后用TCID50法测定病毒滴度。
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