【摘 要】
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目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性。方法:将胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和c
【机 构】
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北京市药品检验所,中国食品药品检定研究院,
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目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性。方法:将胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和c AMP反应元件(c AMP response element,CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞,经加压筛选和单克隆分离培养获得稳定的单克隆细胞株;使用药物反应强的单克隆细胞株建立报告基因方法;对新建方法进行条件优化,并用优化的方法对促胰岛素分泌肽融合蛋白原液和成品进行生物学活性测定。结果:经加压筛选和单克隆分离培养后获得对Byetalog强反应性的细胞株CHOglpar/crec14;新建方法剂量反应曲线符合四参数方程,R~2大于0.99;对促胰岛素分泌肽融合蛋白的原液和成品分别测定3次,RSD值均低于5.0%,回收率在70%~130%之间。结论:报告基因法操作简便,重复性和准确性都较高,有望作为替代方法应用于促胰岛素分泌肽融合蛋白的生物学活性测定。
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