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目的
探讨转染hSOD1-G93A对NSC-34细胞内铁代谢相关蛋白表达的影响。
方法常规体外培养未转染、转染pcDNA3.1(-)、hSOD1-pcDNA3.1(-)和hSOD1-G93A-pcDNA3.1(-)质粒的NSC-34细胞系;分为正常组、空转组、野生组和突变组。利用免疫组化染色法观察各组细胞的形态变化;通过检测丙二醛(MDA)含量观察各组细胞氧化应激水平;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting分别检测各组细胞内铁代谢相关蛋白的基因和蛋白表达水平。
结果突变组的细胞胞体变圆,突起减少、变短,细胞内MDA含量明显高于其他3组细胞,差异有统计学意义(P<0.05);各组细胞内的转铁蛋白受体(TfR)、二价金属离子转运体1(DMT1)、铁蛋白等基因在基因水平上表达差异无统计学意义(P>0.05);各组细胞内的TfR、DMT1、铁蛋白等在蛋白水平上表达差异无统计学意义(P>0.05),但是突变组细胞铁蛋白表达较正常组细胞明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论转染hSOD1-G93A对NSC-34细胞(突变组)内TfR、DMT1表达无明显影响,但可以使细胞内铁蛋白在蛋白表达水平明显升高。