论文部分内容阅读
目的
获得具有体外活性并且能够用于药物筛选的乙型肝炎病毒(HBV)RNaseH酶。
方法以pMAL-c5xHis为骨架，构建重组基因C型HBV RNase H酶表达质粒，通过大肠埃希菌高效表达出分子量为60KDa的可溶性目的蛋白，通过镍亲和层析法纯化出HBV RNase H酶。Commassie染色和Western Blot方法鉴定目的蛋白；采用寡核苷酸引导的RNA切割法鉴定HBV RNase H酶活性、对温度变化的稳定性及其在HBV RNase H酶抑制剂体外筛选中的应用。
结果Commassie染色、Western Blot分析结合寡核苷酸引导的RNA切割法鉴定显示成功表达和纯化出具有活性的HBV RNase H酶，酶活性对温度变化具有稳定性，并且对HBV RNase H酶抑制剂具有良好的敏感性。
结论通过基因重组和镍亲和层析法可以体外获得具有活性的HBV RNase H酶，并可以用于HBV RNase H酶抑制剂的体外筛选。