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【摘 要】将咪唑盐C14H16BrN5在肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa两个细胞株之间进行细胞毒性试验（MTT法），计算其IC50，探究其对这两种癌细胞的毒性大小。结果显示咪唑盐C14H16BrN5对肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa都具有一定的抑制作用，当咪唑盐C14H16BrN5的浓度越高时，抑制作用越明显。咪唑盐C14H16BrN5对肝癌细胞HEPG2的IC50=54.27umol/L，咪唑盐C14H16BrN5对人宫颈癌细胞HeLa的IC50=22.12umol/L，对比两者的IC50，可以发现咪唑盐C14H16BrN5对人宫颈癌细胞HeLa的抑制作用更明显，而对肝癌细胞HEPG2的抑制作用明显弱于人宫颈癌细胞HeLa。
【关键词】咪唑盐；癌细胞；MTT法
目前癌症的治疗方法有手术切除、放射治疗、化学药物治疗等，但仍主要以化学药物治疗为主。临床用于治疗癌症的化学药物种类较多，如铂类、氮芥类、三唑类等，但大多数药物由于毒性大、不良反应多、生物利用度低，因而应用受到了限制。咪唑作为新型抗癌药物，在各方面都有研究和开发前景[1]。
目前，咪唑在放射增敏剂[1]、细胞色素P450抑制剂[2]、周期素依赖型蛋白激酶抑制剂、血管生成抑制剂、拓扑异构酶抑制剂[3]、法尼基转移酶抑制剂及肿瘤耐药逆转剂这些方面都具有开发和研究的潜在价值[4]。
1实验部分
1.1原材料
肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa（购自中科院上海细胞库）
咪唑盐C14H16BrN5 （嘉兴学院化工系自合成），结构式如下：
1.2主要试剂和耗材
RPMI1640培养基（美国 Hyclone 公司）；RPMI1640双抗（青霉素、链霉素）溶液（Sigma）；DMSO溶液（Sigma）；PBS缓冲溶液（BOSTER）；0.25%胰酶溶液（Hyclone）；新生胎牛血清（四季青）；96孔细胞培养板（NEST，PLT-96）；四甲基偶氮唑盐（ MTT ， 美国Amresco 公司）母液配置：50mg溶于0.01mol/ L PBS缓冲溶液10ml， 配成5mg/ mL 浓度，过滤除菌， 4℃避光保存，现配现用；RPMI1640完全培养基：在50mL离心管中加入10%终浓度的灭活新生胎牛血清后，再加入1%终浓度的双抗溶液。
1.3实验方法
（1）细胞培养：将肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa培养于RPMI1640 完全培养基中， 每2天换液1次， 每3天传代1次。细胞置于37 ℃、5%CO2 饱和湿度的培养箱中， 取对数生长期细胞用于实验。
（2）细胞毒性检测
弃去培养细胞（对数生长期）中的培养液，加入3～4mL PBS液漂洗，弃去PBS。再加入800～1000?L 37℃胰蛋白酶，倒置显微镜下观察，见细胞稍变圆时，加入1～2mLRPMI1640完全培养基停止胰蛋白酶消化细胞作用。最后用吸管反复吹打，使其分散为单个细胞悬液。
取肿瘤细胞悬液，用血球计数板计数，调整细胞悬液浓度至5×104个/mL，不断打匀并接种于96孔细胞培养板，每孔加入100?L细胞悬液，使得每孔细胞数为5000个。小心轻放96孔培养板置培养箱温育（37℃、5%CO2饱合湿度）。待细胞贴壁后， 吸净培养基。每孔加入98?L完全培养基和各稀释度药物2?L（具体浓度见实验结果）。平行设空白对照组（2?LDMSO加98?L培养基）。以上各浓度和对照组均重复至少3个孔。
（3）数据分析
2结果与讨论
3. 结论
近年来在有机物中寻找有效而副作用小的抗癌药物已成为国内外重要的课题，关于抗癌药物的研究也越来越多。根据有关研究显示咪唑盐C14H16BrN5具有一定的抗癌活性。本研究为探究咪唑盐C14H16BrN5对肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa的抑制作用，并比较其抑制作用的大小。
本研究采用MTT法对咪唑盐C14H16BrN5进行体外抗癌活性筛选，研究表明，咪唑盐C14H16BrN5对肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa均具有抑制作用，其抑制率随药物浓度的升高而呈上升趋势，其IC50分别为54.27umol/L和22.12umol/L，可见其对人宫颈癌细胞HeLa的抑制作用明显强于对肝癌细胞HEPG2的抑制作用。由此可知，咪唑盐C14H16BrN5对于癌细胞具有一定的抑制作用，并且在一定的浓度范围内，浓度越大，抑制作用越明显。因此，咪唑盐C14H16BrN5作为抗癌（尤其是宫颈癌）药物具有一定的开发前景。
参考文献：
[1] WU J，MI JL， ZHOU CH. Advance in histamine H3 receptor lig and[J]. Chin Pharm J， 2007， 42（6）：404- 409.
[2] TANABE K， KOJIMA R， HATTA H， et al. Propargylic sulfones possessinga 2-nitroimidazole function： novel hypoxic-cell radiosensitizers with intracellular non-protein thiol depletion ability[J]. Bioorg Med Chem Lett， 2004， 14（10）：2633- 2635.
[3] MILLER TJ， SCHNEIDER RJ， MILLER JA， et al. Photoreceptor cell apoptosis induced by the 2-nitroimidazole radiosensitizer，CI21010， is mediated by p53-linked activation of caspase-3[J].Neurotoxicology， 2006， 27（1）：44- 59.
[4] PAPADOPOULOU MV， ROSENZWEIG HS， BLOOMER WD.Synthesis of a novel nitroimidazole-spermidine derivative as a tumor-targeted hypoxia-selective cytotoxin[J]. Bioorg Med Chem Lett， 2004， 14（6）：1519- 1522
作者简介：
汪秀，女，（1985，4-）硕士，讲师。
尤一 ， 嘉兴学院南湖学院2009级学生。
徐朝阳， 嘉兴学院南湖学院2009级学生。
【关键词】咪唑盐；癌细胞；MTT法
目前癌症的治疗方法有手术切除、放射治疗、化学药物治疗等，但仍主要以化学药物治疗为主。临床用于治疗癌症的化学药物种类较多，如铂类、氮芥类、三唑类等，但大多数药物由于毒性大、不良反应多、生物利用度低，因而应用受到了限制。咪唑作为新型抗癌药物，在各方面都有研究和开发前景[1]。
目前，咪唑在放射增敏剂[1]、细胞色素P450抑制剂[2]、周期素依赖型蛋白激酶抑制剂、血管生成抑制剂、拓扑异构酶抑制剂[3]、法尼基转移酶抑制剂及肿瘤耐药逆转剂这些方面都具有开发和研究的潜在价值[4]。
1实验部分
1.1原材料
肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa（购自中科院上海细胞库）
咪唑盐C14H16BrN5 （嘉兴学院化工系自合成），结构式如下：
1.2主要试剂和耗材
RPMI1640培养基（美国 Hyclone 公司）；RPMI1640双抗（青霉素、链霉素）溶液（Sigma）；DMSO溶液（Sigma）；PBS缓冲溶液（BOSTER）；0.25%胰酶溶液（Hyclone）；新生胎牛血清（四季青）；96孔细胞培养板（NEST，PLT-96）；四甲基偶氮唑盐（ MTT ， 美国Amresco 公司）母液配置：50mg溶于0.01mol/ L PBS缓冲溶液10ml， 配成5mg/ mL 浓度，过滤除菌， 4℃避光保存，现配现用；RPMI1640完全培养基：在50mL离心管中加入10%终浓度的灭活新生胎牛血清后，再加入1%终浓度的双抗溶液。
1.3实验方法
（1）细胞培养：将肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa培养于RPMI1640 完全培养基中， 每2天换液1次， 每3天传代1次。细胞置于37 ℃、5%CO2 饱和湿度的培养箱中， 取对数生长期细胞用于实验。
（2）细胞毒性检测
弃去培养细胞（对数生长期）中的培养液，加入3～4mL PBS液漂洗，弃去PBS。再加入800～1000?L 37℃胰蛋白酶，倒置显微镜下观察，见细胞稍变圆时，加入1～2mLRPMI1640完全培养基停止胰蛋白酶消化细胞作用。最后用吸管反复吹打，使其分散为单个细胞悬液。
取肿瘤细胞悬液，用血球计数板计数，调整细胞悬液浓度至5×104个/mL，不断打匀并接种于96孔细胞培养板，每孔加入100?L细胞悬液，使得每孔细胞数为5000个。小心轻放96孔培养板置培养箱温育（37℃、5%CO2饱合湿度）。待细胞贴壁后， 吸净培养基。每孔加入98?L完全培养基和各稀释度药物2?L（具体浓度见实验结果）。平行设空白对照组（2?LDMSO加98?L培养基）。以上各浓度和对照组均重复至少3个孔。
（3）数据分析
2结果与讨论
3. 结论
近年来在有机物中寻找有效而副作用小的抗癌药物已成为国内外重要的课题，关于抗癌药物的研究也越来越多。根据有关研究显示咪唑盐C14H16BrN5具有一定的抗癌活性。本研究为探究咪唑盐C14H16BrN5对肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa的抑制作用，并比较其抑制作用的大小。
本研究采用MTT法对咪唑盐C14H16BrN5进行体外抗癌活性筛选，研究表明，咪唑盐C14H16BrN5对肝癌细胞HEPG2、人宫颈癌细胞HeLa均具有抑制作用，其抑制率随药物浓度的升高而呈上升趋势，其IC50分别为54.27umol/L和22.12umol/L，可见其对人宫颈癌细胞HeLa的抑制作用明显强于对肝癌细胞HEPG2的抑制作用。由此可知，咪唑盐C14H16BrN5对于癌细胞具有一定的抑制作用，并且在一定的浓度范围内，浓度越大，抑制作用越明显。因此，咪唑盐C14H16BrN5作为抗癌（尤其是宫颈癌）药物具有一定的开发前景。
参考文献：
[1] WU J，MI JL， ZHOU CH. Advance in histamine H3 receptor lig and[J]. Chin Pharm J， 2007， 42（6）：404- 409.
[2] TANABE K， KOJIMA R， HATTA H， et al. Propargylic sulfones possessinga 2-nitroimidazole function： novel hypoxic-cell radiosensitizers with intracellular non-protein thiol depletion ability[J]. Bioorg Med Chem Lett， 2004， 14（10）：2633- 2635.
[3] MILLER TJ， SCHNEIDER RJ， MILLER JA， et al. Photoreceptor cell apoptosis induced by the 2-nitroimidazole radiosensitizer，CI21010， is mediated by p53-linked activation of caspase-3[J].Neurotoxicology， 2006， 27（1）：44- 59.
[4] PAPADOPOULOU MV， ROSENZWEIG HS， BLOOMER WD.Synthesis of a novel nitroimidazole-spermidine derivative as a tumor-targeted hypoxia-selective cytotoxin[J]. Bioorg Med Chem Lett， 2004， 14（6）：1519- 1522
作者简介：
汪秀，女，（1985，4-）硕士，讲师。
尤一 ， 嘉兴学院南湖学院2009级学生。
徐朝阳， 嘉兴学院南湖学院2009级学生。