伪狂犬病病毒Min-A株gE基因序列分析及其真核表达质粒的构建

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根据已发表的伪狂犬病毒(PrV)的基因序列,在PrVgE基因起始密码子和终止密码子的上、下游分别设计一对引物PCL1和PCL2,在PCL1和PCL2的5端分别加上KpnI和BamHI位点,以PrVMin-A株DNA为模板成功地扩增到约1.8kb的片段,经酶切鉴定为PrVgE基因。将此PCR产物以KpnI和BamHI消化,回收后与经KpnI/BamHI酶解的pUC119连接、转化,获得了明显大于载体的重组质粒,经限制性酶切和序列部分测定鉴定了阳性重组质粒pRZE。将pRZE分别经EcoRI/BamHI和EcoRI/PstI酶切,回收gE基因,分别克隆到真核表达载体pCR3-Uni和杆状病毒载体pVL1392上,获得pCRE和pVLE重组子。为下一步构建重组病毒并在昆虫细胞和哺乳细胞中表达PrVgE糖蛋白奠定了基础。
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