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基于近轴条件下的高斯公式，导出了电子目镜显微镜的几何和物理景深公式并分析了其适用的条件。通常情况下，电子目镜显微镜的景深值由其物理景深决定，景深值与显微物镜的有效数值孔径的平方成反比，与电子目镜的放大倍数无直接关系。用Zemax软件模拟了10×20电子目镜显微镜的景深，软件模拟值与计算值完全相符。为了验证景深公式，设计了毛细管测量系统，用其测量了有效数值孔径不同时电子目镜显微镜的景深以及有效数值孔径等于显微物镜数值孔径时不同规格电子目镜显微镜的景深。实验测量值与计算值十分吻合。