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摘要：目的：探讨垂体肿瘤转化基因（PTTG）和C-myc在妊娠滋养细胞疾病（GTD）发生发展中的作用。方法：收集株洲市中心医院收治的GTD病例共55例，同时收集株洲市中心医院正常早孕行人工流产的绒毛标本21例作为对照。并应用免疫组化SP法检测21例正常的早孕绒毛、15例完全性葡萄胎、10例部分性葡萄胎、14例侵蚀性葡萄胎与15例绒癌石蜡包埋组织中PTTG和C-myc的蛋白表达情况。结果：PTTG和C-myc蛋白在细胞滋养层细胞和合体滋养细胞都表达，两者在正常早孕绒毛与GTD中主要表达于细胞浆，偶表达于细胞核。正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌中PTTG蛋白的阳性表达率分别为14.3％、24.0％、78.6％、80.0％；C-myc蛋白的阳性表达率分别为23.5％、30.0％、71.4％、73.3％。PTTG和C－myc在正常早孕绒毛和葡萄胎中的表达量差异无显著性意义（P＞0.05）；侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达量明显高于正常早孕绒毛和葡萄胎（P＜0.05)；绒癌的表达量高于侵蚀性葡萄胎，但差异无显著意义（P＞0.05）。在GTD中，PTTG和C-myc的蛋白表达呈正相关（R＝0.724, F=49.663,P＜0.05 )。
结论PTTG和C-myc的表达上调可能是滋养细胞恶性转化的早期事件，并在GTD的恶化进展中起重要作用。
关键词：妊娠滋养细胞疾病；PTTG；C-myc；免疫组织化学
【中图分类号】R737.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602(2014)05-0016-02
葡萄胎发病率在世界不同地区变化很大，亚洲国家比欧洲或北美高3～10倍，葡萄胎是包括我国在内的东南亚国家常见病之一，我国葡萄胎平均发病率为290/10万 [1]，其中10～20％在清宫后恶变为侵蚀性葡萄胎或绒癌，早期即可经血液途径转移至肺﹑脑等处，严重危害妇女的健康。葡萄胎恶变的机制仍不十分清楚，近年来发现PTTG基因的表达与肿瘤的发生、发展密切相关。
据已有的报道，关于PTTG基因在肿瘤形成中的作用研究集中在卵巢癌，垂体瘤中，而在滋养细胞肿瘤中的作用机制研究很少。本研究通过SP免疫组化的技术对正常妊娠绒毛组织和GTD中的PTTG及C-myc蛋白的表达情况进行检测，比较两者的表达水平，从而探讨PTTG与C-myc在GTD的发生发展中的作用及可能的作用机制作初步探讨。
1 资料和方法
1.1 组织来源：
正常早孕绒毛组（Normal chorionic villi of first trimester,N）:选取株洲市中心医院妇产科门诊2013年12月至2014年2月正常早孕行人工流产的绒毛标本21例，年龄21～38岁，平均（27±4）岁，均无异常妊娠史。取上述正常早孕行人工流产的绒毛标本，石蜡包埋，作HE染色和免疫组化实验用。
GTD组： 收集株洲市中心医院病理科存档GTD石蜡包埋标本共55例，其中部分性葡萄胎10例，年龄20～43岁，平均（31±7）岁；完全性葡萄胎15例，年龄22～47岁，平均（29±8）岁；侵蚀性葡萄胎14例，年龄31～49岁，平均（43±6）岁；绒毛膜癌15例，年龄29～54岁，平均（43±9）岁。
1.2 方法免疫组化检测PTTG和C-myc蛋白的表达：
(1)HE染色
全部收集的标本均经4％中性甲醛液固定，梯度脱水、浸蜡和包埋。所取蜡块行5μm连续切片、烘烤、脱蜡、HE染色、透明和封片。
(2) 采用SP法进行免疫组化检测，具体步骤如下：
① 石蜡切片，厚5μm，用经多聚赖氨酸处理的载玻片捞片，置烤箱60℃，60分钟。
② 切片脱蜡至水：二甲苯浸泡30分钟×2次；100％乙醇浸泡30分钟×2次，95％、85％、75％乙醇依次浸泡各10分钟；蒸馏水浸泡5分钟×3次。
③ 抗原修复处理：按不同的抗体要求进行抗原修复。以0.01M，pH6.0柠檬酸高压或微波炉修复。室温冷却后，蒸馏水浸泡5分钟×3次，继以0.01M PBS浸洗5分钟×3次。
④ 滴加A液（3％过氧化氢溶液）25μl，室温避光孵育30分钟，以灭活内源性过氧化氢酶活性；0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑤ 滴加B液（封闭用正常山羊血清工作液）25μl，室温孵育30分钟。
⑥ 甩去山羊血清，滴加鼠抗人第一抗体25μl，4℃孵育过夜，0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑦ 滴加C液（生物素化二抗工作液）25μl，室温孵育30分钟，0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑧ 滴加D液（辣根酶标记链霉卵白素工作液）25μl，室温孵育30分钟，0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑨ 滴加新鮮配置的DAB溶液显色1～2分钟（显微镜下控制显色时间）。
⑩ 自来水冲洗，苏木素复染2分钟，0.05％盐酸乙醇分化，自来水冲洗反蓝15分钟，梯度乙醇脱水（100％、95％、85％、75％乙醇浸泡各1分钟），60℃干烤20分钟，中性树胶封片。
1.3 结果判断：
每批免疫组化均设有已知阳性和用PBS代替一抗的阴性对照。PTTG和C-myc均以细胞浆或细胞核内出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞。观察至少10个具代表性高倍视野，对免疫组化结果进行评估。分别对染色强度（0：无着色；1：淡黄色；2：棕黄色；3:棕褐色）和阳性细胞百分数（0：<5％；1：5％～25％；2：26％～50％；3：51％～75％；4：>75%）进行计分，两者相加为免疫组化评分，0分～2分为（－），3分～4分为（＋），5分～6分为（＋＋），7分为（＋＋＋）。
1.4 统计学处理：
实验数据采用SPSS11.5统计软件进行统计分析。免疫组化实验结果应用等级资料的秩和检验对相关组间进行显著性检验；采用Chi-square test分析法对GTD与PTTG和C-myc的蛋白表达的关系进行相关性分析；结果均以P<0.05为差异有显著意义，P<0.01为差异有极显著意义。
2 结果
2．1 PTTG的蛋白表达
2. 1. 1 PTTG蛋白免疫组化定位：
PTTG蛋白的在细胞滋养层细胞和在合体滋养层细胞中都有阳性表达。在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌组织，PTTG蛋白的表达以细胞浆为主，偶尔表达于细胞核，未见细胞膜表达。
2．1．2 PTTG蛋白表达半定量分析：
PTTG蛋白在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌的阳性表达率分别为14.3%、24.0%、78.6%、80.0%。葡萄胎和正常早孕绒毛相比较，PTTG蛋白的表达量的差异无显著意义（P＞0.05）,侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌的表达量明显高于正常早孕绒毛和葡萄胎（P＜0.05）,侵蚀性葡萄胎的表达量低于绒毛膜癌，但差异无显著意义（P＞0.05）。见"表1,"
表1 正常早孕绒毛和GTD组织中PTTG的蛋白表达
组别例数 PTTG的蛋白表达
－ ＋ ＋＋＋＋＋ 阳性率（％）
正常早孕绒毛 21 182 1014.3%
葡萄胎 25 191 3224.0%
侵蚀性葡萄胎 1432 2778.6%
绒毛膜癌 1531 3880.0%
2．2 C-myc的蛋白表达
2．2．1 C-myc蛋白免疫组化定位：
C-myc蛋白在滋养层细胞和合体滋养细胞都有阳性表达。在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌组织中，C-myc蛋白主要表达于细胞浆，偶尔表达于细胞核。
2．2．2 C-myc蛋白表达半定量分析：
C-myc蛋白在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌的阳性表达率分别为23.5%、 35.0%、71.4%、73.3%。正常早孕绒毛和葡萄胎相比较，C-myc的表达量的差异无显著意义（P＞0.05）；葡萄胎和侵蚀性葡萄胎相比较，C-myc的表达量的差异有显著意义（P＜0.05﹚；侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌相比较，C-myc的表达量的差异无显著意义（P＞0.05）。见表2。
表2 正常早孕绒毛和GTD组织中C-myc的蛋白表达
组别例数 C-myc的蛋白表达
－ ＋ ＋＋＋＋＋ 阳性率（％）
正常早孕绒毛 2117 2 2023.5%
葡萄胎 2518 3 31 35.0%
侵蚀性葡萄胎 1442 35 71.4%
绒毛膜癌 1542 36 73.3%
2.3 GTD中PTTG 与C-myc蛋白表达的相关性：
55例GTD病例中，PTTG和C-myc蛋白表达同时为阳性者为32例，同时为阴性者为10例，表达的一致率为76.4％,呈明显正相关（R＝0.724, F=49.663,P＜0.05﹚。见表3。
表3 GTD中PTTG蛋白和C-myc蛋白表达的相关性
PTTG蛋白C-myc蛋白
阳性 阴性 合计
阳性32739
阴性 6 1016
合计48 1755
3 讨论
人类的hPTTG基因定位于五号染色体的5q33.1。hPTTG cDNA序列由787bp组成，含一个609bp的开放读码框架。编码一条含202个氨基酸的蛋白质,其编码的蛋白在N末端（58～101）和C末端分别有一富含碱基和一富含脯氨酸的区域，前者被认为是一核定位信号区，而后者包含两个PXXP基序，其作为SH3的结合位点参与SH3介导的信号转导途径[2,3]。研究已证明PXXP基序是PTTG在体内多种作用的关键位点[4]。
PTTG家族至少有三个成员，PTTG1定位于5q35.1，而PTTG2，PTTG3分别定位于4p15.1和8q13.1，但与前者不同是它们均不含内显子。Chen等人发现hPTTG2和hPTTG3的cDNA核酸序列与hPTTG1分别有91%和89%的相似性[5]。
hPTTG的mRNA在正常人类睾丸组织胎儿肝组织胸腺有高表达, 而小肠，结肠，胰腺，大脑，肺，胎盘组织中仅有弱表达，其它人类正常组织hPTTG的mRNA表达几乎没有或很低。hPTTG mRNA高表达于垂体，肾上腺，卵巢，子宫内膜，子宫体，肝脏和肾脏等的肿瘤组织中，同时在许多肿瘤细胞系中也有高表达，包括宫颈癌Hela株，绒毛膜癌JEG-3和JAR株，乳腺癌MCF-7，骨源性肉瘤 U-2 OS，肝细胞癌Hep 3B，肺癌 EY，甲状腺癌TC-1[2.3]。在肿瘤细胞株中高表达的hPTTG99%为hPTTG1，hPTTG2仅在三种肿瘤细胞株中有增高，而hPTTG3的表达仅限于肿瘤组织和肿瘤细胞株[6、7]。这些表明不同的hPTTG家族成员在正常细胞和肿瘤形成中起不同的作用。本实验中，PTTG蛋白的表达随着妊娠滋养细胞疾病的恶性程度增高而增加，说明PTTG与妊娠滋养细胞肿瘤有着密切的关系。
C-myc基因是最早于禽类骨髓瘤病毒MC29中发现的一种癌基因[8]。C-myc可诱导细胞周期促进细胞增殖、抑制细胞分化和诱导细胞凋亡[9]。本实验中，C-myc蛋白的表达随着妊娠滋养细胞疾病的恶性程度增高而增加，说明C-myc与妊娠滋养细胞肿瘤有着密切的关系。
近年以来，随着基因和分子生物技术的不断发展，人们已经意识到恶性肿瘤的形成和发展是多基因参与、多步骤的过程。越来越多的肿瘤相关因子被人们发现，并进行了深入的研究，但在众多肿瘤因子中，找出肿瘤发展各个环节的重要因子就具有非常重要的现实意义，将有助于对某种类型的肿瘤进行检测，并将指标量化，从而对肿瘤的诊断、鉴别诊断、预后判断及个体化治疗的選择等方面提供有意义的参考。PTTG可调节细胞有丝分裂，刺激成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达和分泌[10]，促进肿瘤血管形成[6]，通过p53依赖和p53非依赖的方式调节细胞调亡[11]，与C-myc一起作用调节细胞增殖[12]。本实验中，PTTG及C-myc蛋白的表达呈明显正相关性，提示PTTG和C-myc的表达上调可能是滋养细胞恶性转化的早期事件，并在GTD的恶化进展中起重要作用。因此，PTTG和C-myc表达水平的检测可作为葡萄胎恶变预测的参考指标。基因转录异常可能是PTTG和C-myc表达上调的主要原因之一，对它们的深入研究有望在妊娠滋养细胞疾病的发生机制研究领域获得新的进展。
参考文献
[1] 曹泽毅主编.中华妇产科2版.北京：人民卫生出版社，2004.2276～2277.
[2] Zhang X., Horwitz G.A., Prezant T.R., Valentini A., Nakashima M.,Bronstein M.D. and Melmed S.. Structure, expression, and function of human pituitary tumor-transforming gene (PTTG). Mol.Endocrinol.1999. 13, 156-166.
[3] Kakar S.S. Molecular cloning, genomic organization, and identification of the promoter for the human pituitary tumor transforming gene (PTTG). Gene 1999.29, 317-324
[4] KBOELAERT, R YU and et ctl.PTTG's C-terminal PXXP motifs modulate critical cellular processes in vitro.Journal of Molecular Endocrinology(2004)P33,663-667.
[5] Chen L., Puri R., Lefkowitz E.J. et al. Identification of thehuman pituitarytumortransforminggene(hPTTG)family: molecularstructure,expression,andchromosomallocalization. Gene 2000.248, 41-50.
[6] Prezant T.R., Kadioglu P. and Melmed S. An intronless homolog of human proto-oncogene hPTTG is expressed in pituitary tumors:evidence for hPTTG family. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999.84, 1149-1152.
[7] T. Hamid and S.S. Kakar .Histol Histopathol 2003.18: 245-251.
[8] Dedieu J,Gazin C,Rigolet M,et al.Evolutionary conservation of th product of human c-myc exon 1 and its inducible expression in a murine cell line[J].Oncogene,1988,3(5):523.
[9] Hann SR,Thompson CB,Eisenman RN,et al.C-myc oncogene protein synthesis is independent of the cell cycle in human and avian cells[J].Nature,1985,314(6009):366.
[10] A P Heaney and S Melmed, New pituitary oncogenes, Endocrine-Related Cancer (2000) 7 3-15.
[11] Yu R,Heaney AP,Lu W,et al.Pituitary tumor transforming gene causes aneuploidy and p53-independent apoptosis.J Biol Chem,2000,275(47):36502-36505.
[12] Pei L. Identification of c-myc as a down-stream target for pituitary tumor-transforming gene. J. Biol. Chem. 2001.276, 8484-8491.
结论PTTG和C-myc的表达上调可能是滋养细胞恶性转化的早期事件，并在GTD的恶化进展中起重要作用。
关键词：妊娠滋养细胞疾病；PTTG；C-myc；免疫组织化学
【中图分类号】R737.3 【文献标识码】A 【文章编号】1672-8602(2014)05-0016-02
葡萄胎发病率在世界不同地区变化很大，亚洲国家比欧洲或北美高3～10倍，葡萄胎是包括我国在内的东南亚国家常见病之一，我国葡萄胎平均发病率为290/10万 [1]，其中10～20％在清宫后恶变为侵蚀性葡萄胎或绒癌，早期即可经血液途径转移至肺﹑脑等处，严重危害妇女的健康。葡萄胎恶变的机制仍不十分清楚，近年来发现PTTG基因的表达与肿瘤的发生、发展密切相关。
据已有的报道，关于PTTG基因在肿瘤形成中的作用研究集中在卵巢癌，垂体瘤中，而在滋养细胞肿瘤中的作用机制研究很少。本研究通过SP免疫组化的技术对正常妊娠绒毛组织和GTD中的PTTG及C-myc蛋白的表达情况进行检测，比较两者的表达水平，从而探讨PTTG与C-myc在GTD的发生发展中的作用及可能的作用机制作初步探讨。
1 资料和方法
1.1 组织来源：
正常早孕绒毛组（Normal chorionic villi of first trimester,N）:选取株洲市中心医院妇产科门诊2013年12月至2014年2月正常早孕行人工流产的绒毛标本21例，年龄21～38岁，平均（27±4）岁，均无异常妊娠史。取上述正常早孕行人工流产的绒毛标本，石蜡包埋，作HE染色和免疫组化实验用。
GTD组： 收集株洲市中心医院病理科存档GTD石蜡包埋标本共55例，其中部分性葡萄胎10例，年龄20～43岁，平均（31±7）岁；完全性葡萄胎15例，年龄22～47岁，平均（29±8）岁；侵蚀性葡萄胎14例，年龄31～49岁，平均（43±6）岁；绒毛膜癌15例，年龄29～54岁，平均（43±9）岁。
1.2 方法免疫组化检测PTTG和C-myc蛋白的表达：
(1)HE染色
全部收集的标本均经4％中性甲醛液固定，梯度脱水、浸蜡和包埋。所取蜡块行5μm连续切片、烘烤、脱蜡、HE染色、透明和封片。
(2) 采用SP法进行免疫组化检测，具体步骤如下：
① 石蜡切片，厚5μm，用经多聚赖氨酸处理的载玻片捞片，置烤箱60℃，60分钟。
② 切片脱蜡至水：二甲苯浸泡30分钟×2次；100％乙醇浸泡30分钟×2次，95％、85％、75％乙醇依次浸泡各10分钟；蒸馏水浸泡5分钟×3次。
③ 抗原修复处理：按不同的抗体要求进行抗原修复。以0.01M，pH6.0柠檬酸高压或微波炉修复。室温冷却后，蒸馏水浸泡5分钟×3次，继以0.01M PBS浸洗5分钟×3次。
④ 滴加A液（3％过氧化氢溶液）25μl，室温避光孵育30分钟，以灭活内源性过氧化氢酶活性；0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑤ 滴加B液（封闭用正常山羊血清工作液）25μl，室温孵育30分钟。
⑥ 甩去山羊血清，滴加鼠抗人第一抗体25μl，4℃孵育过夜，0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑦ 滴加C液（生物素化二抗工作液）25μl，室温孵育30分钟，0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑧ 滴加D液（辣根酶标记链霉卵白素工作液）25μl，室温孵育30分钟，0.01M PBS冲洗5分钟×3次。甩去多余液体。
⑨ 滴加新鮮配置的DAB溶液显色1～2分钟（显微镜下控制显色时间）。
⑩ 自来水冲洗，苏木素复染2分钟，0.05％盐酸乙醇分化，自来水冲洗反蓝15分钟，梯度乙醇脱水（100％、95％、85％、75％乙醇浸泡各1分钟），60℃干烤20分钟，中性树胶封片。
1.3 结果判断：
每批免疫组化均设有已知阳性和用PBS代替一抗的阴性对照。PTTG和C-myc均以细胞浆或细胞核内出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞。观察至少10个具代表性高倍视野，对免疫组化结果进行评估。分别对染色强度（0：无着色；1：淡黄色；2：棕黄色；3:棕褐色）和阳性细胞百分数（0：<5％；1：5％～25％；2：26％～50％；3：51％～75％；4：>75%）进行计分，两者相加为免疫组化评分，0分～2分为（－），3分～4分为（＋），5分～6分为（＋＋），7分为（＋＋＋）。
1.4 统计学处理：
实验数据采用SPSS11.5统计软件进行统计分析。免疫组化实验结果应用等级资料的秩和检验对相关组间进行显著性检验；采用Chi-square test分析法对GTD与PTTG和C-myc的蛋白表达的关系进行相关性分析；结果均以P<0.05为差异有显著意义，P<0.01为差异有极显著意义。
2 结果
2．1 PTTG的蛋白表达
2. 1. 1 PTTG蛋白免疫组化定位：
PTTG蛋白的在细胞滋养层细胞和在合体滋养层细胞中都有阳性表达。在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌组织，PTTG蛋白的表达以细胞浆为主，偶尔表达于细胞核，未见细胞膜表达。
2．1．2 PTTG蛋白表达半定量分析：
PTTG蛋白在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌的阳性表达率分别为14.3%、24.0%、78.6%、80.0%。葡萄胎和正常早孕绒毛相比较，PTTG蛋白的表达量的差异无显著意义（P＞0.05）,侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌的表达量明显高于正常早孕绒毛和葡萄胎（P＜0.05）,侵蚀性葡萄胎的表达量低于绒毛膜癌，但差异无显著意义（P＞0.05）。见"表1,"
表1 正常早孕绒毛和GTD组织中PTTG的蛋白表达
组别例数 PTTG的蛋白表达
－ ＋ ＋＋＋＋＋ 阳性率（％）
正常早孕绒毛 21 182 1014.3%
葡萄胎 25 191 3224.0%
侵蚀性葡萄胎 1432 2778.6%
绒毛膜癌 1531 3880.0%
2．2 C-myc的蛋白表达
2．2．1 C-myc蛋白免疫组化定位：
C-myc蛋白在滋养层细胞和合体滋养细胞都有阳性表达。在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌组织中，C-myc蛋白主要表达于细胞浆，偶尔表达于细胞核。
2．2．2 C-myc蛋白表达半定量分析：
C-myc蛋白在正常早孕绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌的阳性表达率分别为23.5%、 35.0%、71.4%、73.3%。正常早孕绒毛和葡萄胎相比较，C-myc的表达量的差异无显著意义（P＞0.05）；葡萄胎和侵蚀性葡萄胎相比较，C-myc的表达量的差异有显著意义（P＜0.05﹚；侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌相比较，C-myc的表达量的差异无显著意义（P＞0.05）。见表2。
表2 正常早孕绒毛和GTD组织中C-myc的蛋白表达
组别例数 C-myc的蛋白表达
－ ＋ ＋＋＋＋＋ 阳性率（％）
正常早孕绒毛 2117 2 2023.5%
葡萄胎 2518 3 31 35.0%
侵蚀性葡萄胎 1442 35 71.4%
绒毛膜癌 1542 36 73.3%
2.3 GTD中PTTG 与C-myc蛋白表达的相关性：
55例GTD病例中，PTTG和C-myc蛋白表达同时为阳性者为32例，同时为阴性者为10例，表达的一致率为76.4％,呈明显正相关（R＝0.724, F=49.663,P＜0.05﹚。见表3。
表3 GTD中PTTG蛋白和C-myc蛋白表达的相关性
PTTG蛋白C-myc蛋白
阳性 阴性 合计
阳性32739
阴性 6 1016
合计48 1755
3 讨论
人类的hPTTG基因定位于五号染色体的5q33.1。hPTTG cDNA序列由787bp组成，含一个609bp的开放读码框架。编码一条含202个氨基酸的蛋白质,其编码的蛋白在N末端（58～101）和C末端分别有一富含碱基和一富含脯氨酸的区域，前者被认为是一核定位信号区，而后者包含两个PXXP基序，其作为SH3的结合位点参与SH3介导的信号转导途径[2,3]。研究已证明PXXP基序是PTTG在体内多种作用的关键位点[4]。
PTTG家族至少有三个成员，PTTG1定位于5q35.1，而PTTG2，PTTG3分别定位于4p15.1和8q13.1，但与前者不同是它们均不含内显子。Chen等人发现hPTTG2和hPTTG3的cDNA核酸序列与hPTTG1分别有91%和89%的相似性[5]。
hPTTG的mRNA在正常人类睾丸组织胎儿肝组织胸腺有高表达, 而小肠，结肠，胰腺，大脑，肺，胎盘组织中仅有弱表达，其它人类正常组织hPTTG的mRNA表达几乎没有或很低。hPTTG mRNA高表达于垂体，肾上腺，卵巢，子宫内膜，子宫体，肝脏和肾脏等的肿瘤组织中，同时在许多肿瘤细胞系中也有高表达，包括宫颈癌Hela株，绒毛膜癌JEG-3和JAR株，乳腺癌MCF-7，骨源性肉瘤 U-2 OS，肝细胞癌Hep 3B，肺癌 EY，甲状腺癌TC-1[2.3]。在肿瘤细胞株中高表达的hPTTG99%为hPTTG1，hPTTG2仅在三种肿瘤细胞株中有增高，而hPTTG3的表达仅限于肿瘤组织和肿瘤细胞株[6、7]。这些表明不同的hPTTG家族成员在正常细胞和肿瘤形成中起不同的作用。本实验中，PTTG蛋白的表达随着妊娠滋养细胞疾病的恶性程度增高而增加，说明PTTG与妊娠滋养细胞肿瘤有着密切的关系。
C-myc基因是最早于禽类骨髓瘤病毒MC29中发现的一种癌基因[8]。C-myc可诱导细胞周期促进细胞增殖、抑制细胞分化和诱导细胞凋亡[9]。本实验中，C-myc蛋白的表达随着妊娠滋养细胞疾病的恶性程度增高而增加，说明C-myc与妊娠滋养细胞肿瘤有着密切的关系。
近年以来，随着基因和分子生物技术的不断发展，人们已经意识到恶性肿瘤的形成和发展是多基因参与、多步骤的过程。越来越多的肿瘤相关因子被人们发现，并进行了深入的研究，但在众多肿瘤因子中，找出肿瘤发展各个环节的重要因子就具有非常重要的现实意义，将有助于对某种类型的肿瘤进行检测，并将指标量化，从而对肿瘤的诊断、鉴别诊断、预后判断及个体化治疗的選择等方面提供有意义的参考。PTTG可调节细胞有丝分裂，刺激成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达和分泌[10]，促进肿瘤血管形成[6]，通过p53依赖和p53非依赖的方式调节细胞调亡[11]，与C-myc一起作用调节细胞增殖[12]。本实验中，PTTG及C-myc蛋白的表达呈明显正相关性，提示PTTG和C-myc的表达上调可能是滋养细胞恶性转化的早期事件，并在GTD的恶化进展中起重要作用。因此，PTTG和C-myc表达水平的检测可作为葡萄胎恶变预测的参考指标。基因转录异常可能是PTTG和C-myc表达上调的主要原因之一，对它们的深入研究有望在妊娠滋养细胞疾病的发生机制研究领域获得新的进展。
参考文献
[1] 曹泽毅主编.中华妇产科2版.北京：人民卫生出版社，2004.2276～2277.
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