谷氨酰内切酶的原核表达及生物化学特性分析

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目的原核表达谷氨酰内切酶,评价其生物化学特性。方法 PQE60Glu△Cmut5质粒转化大肠埃希菌M15,经异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导、Ni-NTA亲和层析等步骤获得重组谷氨酰内切酶。以偶氮酪蛋白为底物测定其酶活性,分析底物浓度、温度、pH、金属离子和EDTA对酶活性的影响。采用SDS-PAGE电泳和质谱研究谷氨酰内切酶对Hb的酶解作用。结果重组谷氨酰内切酶可以在M15菌中高效表达,并具有较高的酶活性。SDS-PAGE分析显示其相对分子质量约33 000。谷氨酰内切酶的Km值为0.26 mm
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