【摘 要】
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目的 探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用.方法 采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSAE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实
【机 构】
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卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京,10021;
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目的 探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用.方法 采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSAE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量 PCR验证结果 可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用.将靶基因APP mRNA的野生及突变3UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点.结果 根据microRNA芯片结果 筛选出在3、6月龄APPSWE/PSI AE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量 PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高.通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的把基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5 Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少.将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3 UTR的结合位点.结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3UTR区城.
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