【摘 要】
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目的 观察应用质粒载体转染白细胞介素10(IL-10)基因至小鼠移植心肌细胞内的转染效率和基因的表达效率,探讨IL-10分子在移植物急性排斥反应中的意义.方法 以C57BL/6小鼠为供
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目的 观察应用质粒载体转染白细胞介素10(IL-10)基因至小鼠移植心肌细胞内的转染效率和基因的表达效率,探讨IL-10分子在移植物急性排斥反应中的意义.方法 以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者,建立异位心脏移植模型.根据移植前经供心升主动脉冠脉灌注试剂的不同,将受者分为4组,每组20只.A组:灌注30 μl的生理盐水;B组:灌注30 μl的空白质粒;C组:灌注30 μl的IL-10基因;D组:灌注30 μl的腺相关病毒(AAV)增强型IL-10.移植后1、3、5和7 d切取移植心脏,进行病理学检查、移植心心肌组织中基因产物的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和IL-10的免疫组织化学检测.并观察各组存活受者的一般情况和移植心存活时间.结果 病理学观察显示:A、B组移植心在术后第3 d起出现了明显的排斥反应改变,而C、D组第3、5和7 d移植心排斥反应改变程度均较A、B组明显减轻.移植后第1和3 d,A、B组移植心心肌细胞中可见低水平的IL-10 mRNA基因和IL-10蛋白的表达,而第5和7 d时几乎检测不到;C、D组在各个时间段都可见明显的IL-10 mRNA基因和IL-10蛋白表达.A、B组移植心存活时间分别为(8.125±0.991)d和(7.714±0.756)d;C、D组移植心存活时间分别为(15.714±2.498)d和(17.857±1.864)d.C、D组与A、B组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 质粒载体能有效地将IL-10基因转染入小鼠心肌细胞并进行表达,而采用AAV的末端反向重复序列(ITRs)可以提高质粒转染效率和IL-10表达水平.局部高表达的IL-10能减轻移植心的排斥反应,延长其存活时间.
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