【摘 要】
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目的 构建针对生存素的小分子RNA干扰表达质粒,研究siRNA表达质粒沉默生存素基因后对大肠癌细胞株SW480侵袭性和增殖性的影响.方法 用pRNAT U6.1/Neo载体构建生存素siRNA表达
【机 构】
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南京医科大学附属淮安第一医院,223300
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目的 构建针对生存素的小分子RNA干扰表达质粒,研究siRNA表达质粒沉默生存素基因后对大肠癌细胞株SW480侵袭性和增殖性的影响.方法 用pRNAT U6.1/Neo载体构建生存素siRNA表达质粒(pRNAT/sur-siRNA),该质粒转染SW480细胞株48小时后,用Westeron blot和半定量RT-PCR分析生存素蛋白和mRNA表达的变化.G418 400 μg/L筛选阳性克隆细胞株(sur-siRNA/SW480),MTT法检测SW480细胞体外增殖的变化;细胞侵袭性实验研究SW480细胞的侵袭性变化.结果 成功地构建了pRNAT/sur-siRNA表达质粒,并且该质粒明显下调SW480细胞生存素蛋白和mRNA的表达水平,分别下调85%,80%.G418 400μg/L筛选出转染pRNAT/sur-siRNA的SW480细胞株(sur-siRNA/SW480);sur-siRNA/SW480细胞增殖受到显著抑制.抑制率为37.4%(P<0.01);细胞侵袭实验示sur-siRNA/SW480细胞的穿透数为(153±66)个,而对照组pRNAT/SW480、SW480细胞的穿透数为(505±65),(578±98)个细胞,sur-siRNA/SW480细胞的穿透数与对照组相比显著减少(P<0.01).结论 针对生存素siRNA可以显著降低生存素的表达,抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭,该生存素siRNA序列可能成为治疗结肠癌的一种有效手段.
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