猪繁殖与呼吸综合征病毒-脂多糖刺激对中性粒细胞黏附猪肺微血管内皮细胞的影响

来源 :中国畜牧兽医 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wwjnb2009888
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[目的]研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单独和联合脂多糖(LPS)刺激对肺脏募集中性粒细胞(Neu)的影响,以及猪肺微血管内皮细胞(MVECs)在其中的作用.[方法]取约10日龄仔猪的肺脏组织,采用Ⅱ型胶原酶消化和差速贴壁法,分离培养原代MVECs,采用密度梯度离心法分离猪外周血Neu;以PRRSV HN株或PRRSV-LPS刺激Neu和M VECs后,将Neu加入培养M VECs的培养板,孵育1h,4%多聚甲醛固定,瑞氏染色,观察并计数分析各组黏附的Neu数量;采用免疫细胞化学染色法检测MVECs对P-选择素和E-选择素的表达;采用虎红溶液染色法测定分析P-选择素和E-选择素抗体封闭MVECs时,PRRSV HN株或PRRSV-LPS刺激对Neu黏附于MVECs数量的影响.[结果]分离培养的MVECs呈CD34免疫荧光染色阳性,阳性率约为92%;PRRSV HN株刺激18h,黏附于MVECs的Neu数量显著增加(P<0.05);PRRSV-LPS联合刺激时,黏附的Neu数量显著多于LPS单独刺激(P<0.05);PRRSV或PRRSV-LPS刺激Neu和MVECs二者时,黏附Neu数量的增加比单独刺激M VECs或Neu更明显;免疫细胞化学染色显示,MVECs强阳性表达P-选择素和E-选择素;用P-选择素和E-选择素抗体封闭MVECs时,PRRSV或PRRSV-LPS刺激诱导的Neu黏附增加呈不同程度下降,E-选择素封闭时具有显著差异(P<0.05).[结论]PRRSV感染能促进Neu与MVECs黏附,亦能增加后继LPS刺激时黏附的Neu数量,MVECs表达的E-选择素是介导PRRSV致Neu黏附增加的重要分子之一.
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