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目的：构建人胰腺核糖核酸酶（hpRNase）原核表达载体、获得纯化hpRNase蛋白，为构建乳腺癌单链免疫毒素奠定基础。方法：针对编码hpRNase成熟蛋白基因的cDNA序列设计相应的引物，通过反转录PCR技术，从一例胰腺切除患者的组织标本中，扩增出编码hpRNase成熟蛋白的cDNA序列，亚克隆入表达载体pPROEX—HTb；在大肠杆菌BL21中经1PTG诱导融合蛋白表达，并用镍离子交换树脂进行蛋白纯化；通过RNA水解实验验证hpRNase重组蛋白的活性。结果：经PCR、酶切、测序等方法鉴定，hpRNa