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摘 要：近些年人们对食品安全问题非常重视，为此我国的很多科研机构在都纷纷对食品安全进行研究。其中蔬菜中的农药残留问题就是其中备受重视的一个研究课题。这是因为当前的很多蔬菜在种植的过程中都会喷洒很多农药，造成蔬菜农药残留超标，影响人们的食用安全。本文以市场中较为常见的7氨基甲酸酯类农药为例，利用高效液相色谱法对其残留情况进行了研究。希望本文的研究可以为蔬菜农药残留检测水平提供一些参考依据。
关键词：高效液相色谱法；蔬菜；氨基甲酸酯类；农药残留；测量
作为一种高效杀虫剂，氨基甲酸酯类农药在蔬菜种植中得到了广泛的应用，虽然这类农药本身具有高效低毒、低残留的特点，但是如果菜农在使用的过程中没有按照合理的方法进行喷洒，也会造成蔬菜农药残留超标。因此有必要对其残留含量进行一定的检测。目前对氨基甲酸酯类农药进行检测时所采用的方法有很多种，本文主要采用了高效液相色谱法，测定了某省蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药的残留量，以期为蔬菜中氨基甲酸酯类农药多组分残留的技术方法标准提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂与仪器。乙睛和甲醇（色谱纯），美国TE-DIA试剂公司；氯化钠（优级纯），辽宁沈阳新西试剂厂；Cleanert NH2 SPE柱和0. 22 μm滤膜，美国Agela公司；二氯甲烷（色谱纯），美国 J. T Baker试剂公司。匀浆机，德国IKA-WERIKE公司；10600型食物调理机，德国BRAUN公司；TGL-20B高速离心机和WH300旋涡混合器，上海安亭科学仪器厂；HH-8数显恒温水浴锅，杰瑞尔电器有限公司；EVAP112型旋转氮吹仪，美国Organomation Associates Jnc.公司；Transferpette移液枪和Dispensette瓶口移液器，德国BRAND公司；1100液相色谱仪（配有分析系统、自动进样器、工作站以及數据处理软件），美国Agilent科技有限公司；DCX柱后衍生系统，美国Dickering Laboratorie，公司。
1.1.2 柱后衍生试剂。OPA邻苯二甲醛、巯基乙醇， CB910OPA稀释剂和CB130水解试剂均为美国Pickering Laborato-rie，公司产品。首先称取2.0g巯基乙醇溶于950mlOPA稀释液中，再称取0.1g邻苯二甲醛溶于10ml甲醇中，将2种液体混合摇匀，上述溶液需每周配制备用。
1.1.3 标准物质。7种农药标准品为涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜、灭多威、甲萘威、克百威、3-0H克百威，均由农业部环境监测总站提供。
1.2 方法
1.2.1 样品采集。从某省内不同季节、不同地区的超市、蔬菜大棚、批发市场等地购买不同种类蔬菜，每个样品取2kg，将蔬菜先切成块，然后在食物调理机中搅碎，取约200g搅好的样品，用高速组织匀浆机进行匀浆直至糊状，将匀好的样品放入聚乙烯瓶中并贴标签，于-20～-16℃冻存。
1.2.2 样品提取。在聚苯乙烯离心管中加入1.0g氯化钠，备用。称取20.0g匀浆好的样品，加入40ml乙腈，在匀浆机上匀浆1min，然后5000r/min离心2min，取出后静置。
1.2.3 样品净化。吸取10ml上清液至烧杯中，将烧杯移至连通氮气的恒温水浴锅上，将氮气通至烧杯中，水浴锅调至70℃蒸烧杯中液体至尽干，取下烧杯，待用。将SPE装置固定于干净试管上，用甲醇-二氯甲烷混合液（1：99，V/V）洗脱SPE2次，每次2m1。用混合液冲洗烧杯3次，每次2ml，将烧杯中的液体倒入SPE（注意勿让SPE中的液体流尽，否则柱子失效）。将盛放洗脱液的试管置于水温50℃的氮吹仪内，调整气流大小，吹至液体尽干，取出试管，用3m1甲醇和2ml水定容至5ml，混匀。将试管中混合液用安装了0.22μm滤膜的注射器打入上机样品瓶内，待测。
1.2.4 HPLC测定。将上机样品瓶放入液相色谱仪的槽内，按照空白、空白平行、标样、添加标、添加标平行、样品的顺序进行测定。测定期间，每隔10个左右样品打1针标样，以校对机器的平行性和准确性。以保留时间定性，以样品峰面积与标准液峰面积比较定量·分析条件：C18预柱，4.6cm×4.5cm；C8分析柱，4.6cmx25.0cm，5μm；柱温42℃；荧光检测器波氏为λe×330nm和λe×465nm；反应溶剂梯度与流速见表1。
2 结果与分析
2.1 分离条件的选择
为获得最佳分离效果，对甲醇与水的体积比进行多种配比试验，考察了甲醇与水作为流动相的分离效果。结果表明，甲醇配比越大，出峰越快，且峰型越好，但分离度较差；而当水的配比加大时，分离度较好，但峰形宽，分析时间较长，出峰较慢。当采用1.2.4甲醇一水配比时，基线平直且峰形对称，与其他杂质峰并未重叠，且分离完全。因此，选择该甲醇一水配比作为流动相。
2.2 组分分离情况
在该试验所选择的条件下，7种氨基甲酸a类农药得到很好的分离，经过与单标比较定性，其出峰顺序依次为1.涕灭威砜、2.涕灭威亚砜、3.灭多威、4.3-羟基克百威、5.涕灭威、6.克百威和7.甲萘威（图1）。
2.3 方法的添加回收率和精密度。在蔬菜样品中添加0.05，0.10，0.50mg/kg3种浓度的7种氨基甲酸酯类农药标样，考察添加回收率。7种农药的回收率在74.6%-107.6%，精密度在10%以内，说明该方法精密度较好，前处理和仪器条件都较稳定，满足农药多残留分析要求。
3 讨论
目前，氨基甲酸酯类农药残留的检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱一质谱法、液相柱后衍生法、酶抑制法、液相色谱一串联质谱法等。其中酶抑制法存在测定农药种类有限等问题，但可作为仪器分析方法的有益补充；高效液相色谱法常用的检测器是紫外检测器，灵敏度不高。而荧光分析法以灵敏度高、操作简便、快速等优点在众多分析方法中尤其突出冈。为此，笔者根据我国农业行业标准NY/T761-2008（（蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》，采用配荧光检测器和柱后衍生系统的高效液相色谱仪测定了某省蔬菜中7种氨基甲酸酯类类农药的残留量，以期为蔬菜中氨基甲酸酯类农药多组分残留的技术方法标准提供参考。
在本研究中，选择有代表性的蔬菜，建立以乙腈为提取溶液，高速匀浆提取样品，氨基固相萃取柱净化，采用高效液相色谱柱后衍生荧光法同时测定了蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药的残留量网。该方法简化了样品的前处理步骤，节省了时间，并使分析灵敏度显著提高，稳定性较好，同时具有操作简便、方法实用、重现性好等特点，完全可满足现代社会所需要的简便、快速、灵敏、准确的农药多残留分析要求。
参考文献
[1]张帆，黄志强，张莹，李忠海，王美玲.高效液相色谱-串联质谱法测定食品中20种氨基甲酸酯类农药残留[J].色谱，2010（4）.
[2]邓立刚，李增梅，郭长英，赵善仓，王玉涛，毛江胜.超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药残留[J].食品科学，2011（6）.
[3]龚久平，李燕，洪云菊，易志坚，高静，贺红周.高效液相色谱法测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留方法优化[J].西南农业学报，2009（5）.
[4]张帆，李忠海，王利兵，黄志强，张莹，王美玲.食品中氨基甲酸酯类农药残留的检测方法研究进展[J].中国食物与营养，2010（2）.
关键词：高效液相色谱法；蔬菜；氨基甲酸酯类；农药残留；测量
作为一种高效杀虫剂，氨基甲酸酯类农药在蔬菜种植中得到了广泛的应用，虽然这类农药本身具有高效低毒、低残留的特点，但是如果菜农在使用的过程中没有按照合理的方法进行喷洒，也会造成蔬菜农药残留超标。因此有必要对其残留含量进行一定的检测。目前对氨基甲酸酯类农药进行检测时所采用的方法有很多种，本文主要采用了高效液相色谱法，测定了某省蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药的残留量，以期为蔬菜中氨基甲酸酯类农药多组分残留的技术方法标准提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂与仪器。乙睛和甲醇（色谱纯），美国TE-DIA试剂公司；氯化钠（优级纯），辽宁沈阳新西试剂厂；Cleanert NH2 SPE柱和0. 22 μm滤膜，美国Agela公司；二氯甲烷（色谱纯），美国 J. T Baker试剂公司。匀浆机，德国IKA-WERIKE公司；10600型食物调理机，德国BRAUN公司；TGL-20B高速离心机和WH300旋涡混合器，上海安亭科学仪器厂；HH-8数显恒温水浴锅，杰瑞尔电器有限公司；EVAP112型旋转氮吹仪，美国Organomation Associates Jnc.公司；Transferpette移液枪和Dispensette瓶口移液器，德国BRAND公司；1100液相色谱仪（配有分析系统、自动进样器、工作站以及數据处理软件），美国Agilent科技有限公司；DCX柱后衍生系统，美国Dickering Laboratorie，公司。
1.1.2 柱后衍生试剂。OPA邻苯二甲醛、巯基乙醇， CB910OPA稀释剂和CB130水解试剂均为美国Pickering Laborato-rie，公司产品。首先称取2.0g巯基乙醇溶于950mlOPA稀释液中，再称取0.1g邻苯二甲醛溶于10ml甲醇中，将2种液体混合摇匀，上述溶液需每周配制备用。
1.1.3 标准物质。7种农药标准品为涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜、灭多威、甲萘威、克百威、3-0H克百威，均由农业部环境监测总站提供。
1.2 方法
1.2.1 样品采集。从某省内不同季节、不同地区的超市、蔬菜大棚、批发市场等地购买不同种类蔬菜，每个样品取2kg，将蔬菜先切成块，然后在食物调理机中搅碎，取约200g搅好的样品，用高速组织匀浆机进行匀浆直至糊状，将匀好的样品放入聚乙烯瓶中并贴标签，于-20～-16℃冻存。
1.2.2 样品提取。在聚苯乙烯离心管中加入1.0g氯化钠，备用。称取20.0g匀浆好的样品，加入40ml乙腈，在匀浆机上匀浆1min，然后5000r/min离心2min，取出后静置。
1.2.3 样品净化。吸取10ml上清液至烧杯中，将烧杯移至连通氮气的恒温水浴锅上，将氮气通至烧杯中，水浴锅调至70℃蒸烧杯中液体至尽干，取下烧杯，待用。将SPE装置固定于干净试管上，用甲醇-二氯甲烷混合液（1：99，V/V）洗脱SPE2次，每次2m1。用混合液冲洗烧杯3次，每次2ml，将烧杯中的液体倒入SPE（注意勿让SPE中的液体流尽，否则柱子失效）。将盛放洗脱液的试管置于水温50℃的氮吹仪内，调整气流大小，吹至液体尽干，取出试管，用3m1甲醇和2ml水定容至5ml，混匀。将试管中混合液用安装了0.22μm滤膜的注射器打入上机样品瓶内，待测。
1.2.4 HPLC测定。将上机样品瓶放入液相色谱仪的槽内，按照空白、空白平行、标样、添加标、添加标平行、样品的顺序进行测定。测定期间，每隔10个左右样品打1针标样，以校对机器的平行性和准确性。以保留时间定性，以样品峰面积与标准液峰面积比较定量·分析条件：C18预柱，4.6cm×4.5cm；C8分析柱，4.6cmx25.0cm，5μm；柱温42℃；荧光检测器波氏为λe×330nm和λe×465nm；反应溶剂梯度与流速见表1。
2 结果与分析
2.1 分离条件的选择
为获得最佳分离效果，对甲醇与水的体积比进行多种配比试验，考察了甲醇与水作为流动相的分离效果。结果表明，甲醇配比越大，出峰越快，且峰型越好，但分离度较差；而当水的配比加大时，分离度较好，但峰形宽，分析时间较长，出峰较慢。当采用1.2.4甲醇一水配比时，基线平直且峰形对称，与其他杂质峰并未重叠，且分离完全。因此，选择该甲醇一水配比作为流动相。
2.2 组分分离情况
在该试验所选择的条件下，7种氨基甲酸a类农药得到很好的分离，经过与单标比较定性，其出峰顺序依次为1.涕灭威砜、2.涕灭威亚砜、3.灭多威、4.3-羟基克百威、5.涕灭威、6.克百威和7.甲萘威（图1）。
2.3 方法的添加回收率和精密度。在蔬菜样品中添加0.05，0.10，0.50mg/kg3种浓度的7种氨基甲酸酯类农药标样，考察添加回收率。7种农药的回收率在74.6%-107.6%，精密度在10%以内，说明该方法精密度较好，前处理和仪器条件都较稳定，满足农药多残留分析要求。
3 讨论
目前，氨基甲酸酯类农药残留的检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱一质谱法、液相柱后衍生法、酶抑制法、液相色谱一串联质谱法等。其中酶抑制法存在测定农药种类有限等问题，但可作为仪器分析方法的有益补充；高效液相色谱法常用的检测器是紫外检测器，灵敏度不高。而荧光分析法以灵敏度高、操作简便、快速等优点在众多分析方法中尤其突出冈。为此，笔者根据我国农业行业标准NY/T761-2008（（蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》，采用配荧光检测器和柱后衍生系统的高效液相色谱仪测定了某省蔬菜中7种氨基甲酸酯类类农药的残留量，以期为蔬菜中氨基甲酸酯类农药多组分残留的技术方法标准提供参考。
在本研究中，选择有代表性的蔬菜，建立以乙腈为提取溶液，高速匀浆提取样品，氨基固相萃取柱净化，采用高效液相色谱柱后衍生荧光法同时测定了蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药的残留量网。该方法简化了样品的前处理步骤，节省了时间，并使分析灵敏度显著提高，稳定性较好，同时具有操作简便、方法实用、重现性好等特点，完全可满足现代社会所需要的简便、快速、灵敏、准确的农药多残留分析要求。
参考文献
[1]张帆，黄志强，张莹，李忠海，王美玲.高效液相色谱-串联质谱法测定食品中20种氨基甲酸酯类农药残留[J].色谱，2010（4）.
[2]邓立刚，李增梅，郭长英，赵善仓，王玉涛，毛江胜.超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中7种氨基甲酸酯类农药残留[J].食品科学，2011（6）.
[3]龚久平，李燕，洪云菊，易志坚，高静，贺红周.高效液相色谱法测定蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留方法优化[J].西南农业学报，2009（5）.
[4]张帆，李忠海，王利兵，黄志强，张莹，王美玲.食品中氨基甲酸酯类农药残留的检测方法研究进展[J].中国食物与营养，2010（2）.