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【摘要】[目的]运用醋酸镁比色法对膨化炮制前后的何首乌中的蒽醌成分进行含量测定。考察膨化炮制对何首乌中蒽醌含量的影响。[方法]膨化炮制前后的何首乌分别经直接超声处理、酸水解后超声处理，以1，8—二羟基蒽醌为考察指标，分别测定膨化前后游离蒽醌、结合蒽醌含量。[结果]膨化后何首乌中游离蒽醌和结合蒽醌都有所下降，但结合蒽醌要比游离下降更明显。[结论]以何首乌中蒽醌含量作参考，挤压膨化适合何首乌炮制加工。
【关键词】醋酸镁比色法 膨化炮制 结合蒽琨 游离蒽醌
何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效，在抗衰老、增强机体免疫、抗菌、造血和改善心血管功能等方面有许多独到之处，是滋补肝肾的常用中药，但几种现行的何首乌炮制工艺，如清蒸法、黑豆炮制法、姜制法和酒制法等具有耗时长，操作繁琐，而且连续化操作性差的缺点。所以我们把食品加工中的挤压膨化技术应用于何首乌的炮制加工，这种炮制方法加工方便，口感好。但是膨化加工后何首乌中主要成分含量如何变化，将影响到我们这个技术的可行性。因此我们进行下面的实验对膨化前后何首乌中蒽醌含量进行测定。
1．实验仪器和材料。TU—1901紫外分光光度计，FA1004型精密电子天平，SK8200LH超声仪，DGG－9246A恒温干燥箱、1，8—二羟基蒽醌对照品（中国药品生物制品检定所，批号0829－9702）、何首乌饮片（购买自峨眉仙山中药厂）。
2．蒽醌含量测定。
2．1 对照品溶液的制备。取经105℃干燥至恒重的1，8—二羟基蒽醌对照品适量，精密称定0.5mg置25mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为对照品溶液。
2．2 供试品溶液的制备。分别称取何首乌饮片粉末、膨化后何首乌（过80目筛）各0.5g，分别置于具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇，称重。超声处理30min，放冷，再次称重，用氯仿补足重量。过滤，残留物用甲醇5mL，洗涤2次，合并滤液。将滤液蒸干，加入10mL水使溶解，分别用氯仿10mL萃取3次，合并氯仿萃取液，水层留下备下面试验用[1]。用蒸馏水洗涤氯仿液数次至水层为中性为止[2]，吸弃蒸馏水，氯仿液置于50mL容量瓶中，加氯仿定容至刻度，作为供试品溶液（1）、（1）′，用来测定膨化前后何首乌中游离蒽醌含量。
上面备用水层加0.5mL浓硫酸和氯仿10mL，在70～80水浴加热回流水解2h，放冷，水解液置分液漏斗中，取氯仿层，水层再分别用10mL萃取3次，合并氯仿液，用蒸馏水洗涤氯仿液数次至水层为中性为止[2]，吸弃蒸馏水，氯仿液置于50mL容量瓶中定容至刻度，作为供试品溶液（2）、（2）′，用来测定膨化前后何首乌中结合蒽琨含量。
2．3 波长的选择。何首乌羟基蒽琨类结构含有1，8—二羟基蒽醌母环，它们与醋酸镁均显紫红色，把显色后的对照品和供试品置于400～600nm波长处扫描，可以看到在波长510nm处有最大吸收，因此选择510nm作为测定波长。
2．4 标准曲线的绘制。精密吸取2.1项下的对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL置10mL容量瓶中，于水浴上蒸干，放冷，将残渣用0.035mol/L的醋酸镁—甲醇溶液溶解并定容，以0.035moL/L醋酸镁—甲醇溶液为空白对照品，在510nm波长处测定吸光度，以吸光度（Y）为纵坐标，浓度（X，ug/mL）为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程为：Y＝0.0004X－0.0028（r2＝0.9999）。结果表明：1，8—二羟基蒽醌在400～2400ug范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。
2．5 精密度试验。精密吸取2.1项下的对照品溶液0.5mL，按醋酸镁比色法测定5次，测得吸光度的相对标准偏差（RSD）为0.63%。
2．6 回收率试验。称取已知含量的样品5份，每份0.5g，置50mL容量瓶中，加入1mL对照品溶液，再加入甲醇25mL，称重。超声处理30min，放冷，再次称重，用氯仿补足重量。过滤，残留物用甲醇5mL，洗涤2次，合并滤液。将滤液蒸干，加入10mL水使溶解，分别用氯仿10mL萃取3次，合并氯仿萃取液，用蒸馏水洗涤氯仿液数次至水层为中性为止，吸弃蒸馏水，氯仿液定容于50mL容量瓶中，从容量瓶中取4mL氯仿液，置于10mL容量瓶中，水浴蒸干，将残渣用醋酸镁－甲醇定容至刻度。计算1，8—二羟基蒽醌的回收率。结果表明，平均回收率RSD=2.42%。
2．7 含量测定。精密吸取“2.3”项下的供试品溶液（1） 8mL，置l0mL容量瓶中，水浴蒸干，放冷，将残渣用0.035mol/L醋酸镁-甲醇溶液溶解并定容。以醋酸镁—甲醇溶液为空白对照品，在510nm波长处测定吸光度，计算游离蒽醌的含量，详见下表。
精密吸取“2.3”项下的供试品溶液（2）8mL，置l0mL容量瓶中，蒸干，放冷。残渣用0.035mol/L醋酸镁—甲醇溶液溶解并定容，以醋酸镁—甲醇溶液为空自对照品，在510nm波长处测定吸光度，计算样品中总蒽醌的含量。由此总蒽醌含量减去游离蒽醌含量，即得结合蒽醌含量，详见下表。
膨化前后何首乌中蒽醌含量变化（mg.g-1，n=3）
3．讨论。
3．1 挤压膨化技术很早就应用到食品的膨化加工中，产品具有细胞壁破裂，疏松多孔等特点[3]。何首乌含有较高比例的淀粉，非常适合挤压膨化加工。所以，我们将挤压技术引入何首乌的炮制加工，以期获得细胞壁破裂，溶出成分增多的结果。并且已有研究表明：人参、贝母、白芍等数十种中药经膨化后，水溶性浸出物增加2～19倍，醇溶性浸出物增加2～4倍，提取效能明显增加[4－5]。
3．2 本实验中何首乌经膨化炮制后游离蒽醌、结合蒽醌都有所下降，并且结合蒽醌要比游离蒽醌下降更明显。传统的何首乌炮制目的就是降低结合蒽琨的含量，使结合蒽醌逐渐转为无泻下作用的游离蒽醌[6]，因此以蒽醌含量作参考，何首乌适合进行膨化加工。
3．3 实验对膨化前后的何首乌采用同样的提取方法进行含量测定，目的在于比较相同条件下膨化对何首乌中蒽醌成分含量的影响。实验结果预期膨化后溶出成分增多，但实际上蒽醌含量是下降的。
3．4 因为膨化是应用于何首乌炮制的新方法，何首乌在膨化过程中细胞壁已经破裂，有效成分已经脱出，因此我们可以对膨化后何首乌提取条件进行正交实验，确定出超声提取的最佳时间、频率、温度，回流提取的最佳时间等。避免已经溶出的蒽醌成分在不恰当的提取方法中损失过多。
参考文献
1 任丽建、朱彩凤、尹寿玉.炮制时间对何首乌中蒽醌含量的影响.中国药房.2007.18(3):193～194
2 高严明、陈海云、吴小宇.醋酸镁－甲醇分光光度法测定何首乌中蒽醌类化合物的含量.微量元素与健康研究.2004.21(2):41～42
3 张翠英、王存林、张瑛、王盛民.膨化技术在中药炮制中的应用.陕西中医.2007.28(10):1408～1409
4 王盛民等.中药膨化的实验研究.陕西中医学院学报. 2001.24(6):45～48
5 吴建华等.白芍膨化实验研究.陕西中医学院学报.1999. 22(3):40～42
6 王孝涛、曹晖、刘玉萍.中药采制与炮制技术.北京:华夏出版社,2000:23
【关键词】醋酸镁比色法 膨化炮制 结合蒽琨 游离蒽醌
何首乌具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨之功效，在抗衰老、增强机体免疫、抗菌、造血和改善心血管功能等方面有许多独到之处，是滋补肝肾的常用中药，但几种现行的何首乌炮制工艺，如清蒸法、黑豆炮制法、姜制法和酒制法等具有耗时长，操作繁琐，而且连续化操作性差的缺点。所以我们把食品加工中的挤压膨化技术应用于何首乌的炮制加工，这种炮制方法加工方便，口感好。但是膨化加工后何首乌中主要成分含量如何变化，将影响到我们这个技术的可行性。因此我们进行下面的实验对膨化前后何首乌中蒽醌含量进行测定。
1．实验仪器和材料。TU—1901紫外分光光度计，FA1004型精密电子天平，SK8200LH超声仪，DGG－9246A恒温干燥箱、1，8—二羟基蒽醌对照品（中国药品生物制品检定所，批号0829－9702）、何首乌饮片（购买自峨眉仙山中药厂）。
2．蒽醌含量测定。
2．1 对照品溶液的制备。取经105℃干燥至恒重的1，8—二羟基蒽醌对照品适量，精密称定0.5mg置25mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作为对照品溶液。
2．2 供试品溶液的制备。分别称取何首乌饮片粉末、膨化后何首乌（过80目筛）各0.5g，分别置于具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇，称重。超声处理30min，放冷，再次称重，用氯仿补足重量。过滤，残留物用甲醇5mL，洗涤2次，合并滤液。将滤液蒸干，加入10mL水使溶解，分别用氯仿10mL萃取3次，合并氯仿萃取液，水层留下备下面试验用[1]。用蒸馏水洗涤氯仿液数次至水层为中性为止[2]，吸弃蒸馏水，氯仿液置于50mL容量瓶中，加氯仿定容至刻度，作为供试品溶液（1）、（1）′，用来测定膨化前后何首乌中游离蒽醌含量。
上面备用水层加0.5mL浓硫酸和氯仿10mL，在70～80水浴加热回流水解2h，放冷，水解液置分液漏斗中，取氯仿层，水层再分别用10mL萃取3次，合并氯仿液，用蒸馏水洗涤氯仿液数次至水层为中性为止[2]，吸弃蒸馏水，氯仿液置于50mL容量瓶中定容至刻度，作为供试品溶液（2）、（2）′，用来测定膨化前后何首乌中结合蒽琨含量。
2．3 波长的选择。何首乌羟基蒽琨类结构含有1，8—二羟基蒽醌母环，它们与醋酸镁均显紫红色，把显色后的对照品和供试品置于400～600nm波长处扫描，可以看到在波长510nm处有最大吸收，因此选择510nm作为测定波长。
2．4 标准曲线的绘制。精密吸取2.1项下的对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL置10mL容量瓶中，于水浴上蒸干，放冷，将残渣用0.035mol/L的醋酸镁—甲醇溶液溶解并定容，以0.035moL/L醋酸镁—甲醇溶液为空白对照品，在510nm波长处测定吸光度，以吸光度（Y）为纵坐标，浓度（X，ug/mL）为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程为：Y＝0.0004X－0.0028（r2＝0.9999）。结果表明：1，8—二羟基蒽醌在400～2400ug范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。
2．5 精密度试验。精密吸取2.1项下的对照品溶液0.5mL，按醋酸镁比色法测定5次，测得吸光度的相对标准偏差（RSD）为0.63%。
2．6 回收率试验。称取已知含量的样品5份，每份0.5g，置50mL容量瓶中，加入1mL对照品溶液，再加入甲醇25mL，称重。超声处理30min，放冷，再次称重，用氯仿补足重量。过滤，残留物用甲醇5mL，洗涤2次，合并滤液。将滤液蒸干，加入10mL水使溶解，分别用氯仿10mL萃取3次，合并氯仿萃取液，用蒸馏水洗涤氯仿液数次至水层为中性为止，吸弃蒸馏水，氯仿液定容于50mL容量瓶中，从容量瓶中取4mL氯仿液，置于10mL容量瓶中，水浴蒸干，将残渣用醋酸镁－甲醇定容至刻度。计算1，8—二羟基蒽醌的回收率。结果表明，平均回收率RSD=2.42%。
2．7 含量测定。精密吸取“2.3”项下的供试品溶液（1） 8mL，置l0mL容量瓶中，水浴蒸干，放冷，将残渣用0.035mol/L醋酸镁-甲醇溶液溶解并定容。以醋酸镁—甲醇溶液为空白对照品，在510nm波长处测定吸光度，计算游离蒽醌的含量，详见下表。
精密吸取“2.3”项下的供试品溶液（2）8mL，置l0mL容量瓶中，蒸干，放冷。残渣用0.035mol/L醋酸镁—甲醇溶液溶解并定容，以醋酸镁—甲醇溶液为空自对照品，在510nm波长处测定吸光度，计算样品中总蒽醌的含量。由此总蒽醌含量减去游离蒽醌含量，即得结合蒽醌含量，详见下表。
膨化前后何首乌中蒽醌含量变化（mg.g-1，n=3）
3．讨论。
3．1 挤压膨化技术很早就应用到食品的膨化加工中，产品具有细胞壁破裂，疏松多孔等特点[3]。何首乌含有较高比例的淀粉，非常适合挤压膨化加工。所以，我们将挤压技术引入何首乌的炮制加工，以期获得细胞壁破裂，溶出成分增多的结果。并且已有研究表明：人参、贝母、白芍等数十种中药经膨化后，水溶性浸出物增加2～19倍，醇溶性浸出物增加2～4倍，提取效能明显增加[4－5]。
3．2 本实验中何首乌经膨化炮制后游离蒽醌、结合蒽醌都有所下降，并且结合蒽醌要比游离蒽醌下降更明显。传统的何首乌炮制目的就是降低结合蒽琨的含量，使结合蒽醌逐渐转为无泻下作用的游离蒽醌[6]，因此以蒽醌含量作参考，何首乌适合进行膨化加工。
3．3 实验对膨化前后的何首乌采用同样的提取方法进行含量测定，目的在于比较相同条件下膨化对何首乌中蒽醌成分含量的影响。实验结果预期膨化后溶出成分增多，但实际上蒽醌含量是下降的。
3．4 因为膨化是应用于何首乌炮制的新方法，何首乌在膨化过程中细胞壁已经破裂，有效成分已经脱出，因此我们可以对膨化后何首乌提取条件进行正交实验，确定出超声提取的最佳时间、频率、温度，回流提取的最佳时间等。避免已经溶出的蒽醌成分在不恰当的提取方法中损失过多。
参考文献
1 任丽建、朱彩凤、尹寿玉.炮制时间对何首乌中蒽醌含量的影响.中国药房.2007.18(3):193～194
2 高严明、陈海云、吴小宇.醋酸镁－甲醇分光光度法测定何首乌中蒽醌类化合物的含量.微量元素与健康研究.2004.21(2):41～42
3 张翠英、王存林、张瑛、王盛民.膨化技术在中药炮制中的应用.陕西中医.2007.28(10):1408～1409
4 王盛民等.中药膨化的实验研究.陕西中医学院学报. 2001.24(6):45～48
5 吴建华等.白芍膨化实验研究.陕西中医学院学报.1999. 22(3):40～42
6 王孝涛、曹晖、刘玉萍.中药采制与炮制技术.北京:华夏出版社,2000:23