链重叠PCR构建抗HIV免疫毒素及其表达与鉴定

来源 :免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：andykwok

【摘要】

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目的提高抗HIV免疫毒素DT-ScFv原核表达的可溶性与生物活性。方法利用链重叠PCR融合的方法，构建了免疫毒素DT-ScFv，二者之间添加了connector序列，免疫毒素基因PCR连接测序以后，将

【作者】

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金洪涛金宁一李臻李昌付延军王宏

【机构】

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吉林大学畜牧兽医学院,解放军军事医学科学院全军基因工程重点实验室,暨南大学生命科学技术每院

【出处】

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免疫学杂志

【发表日期】

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2007年1期

【关键词】

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免疫毒素链重叠PCR 原核表达 Immunotoxin Overlapping PCR Prokaryotic expression

【基金项目】

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全军医药卫生科技攻关项目资助（06G127）

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目的提高抗HIV免疫毒素DT-ScFv原核表达的可溶性与生物活性。方法利用链重叠PCR融合的方法，构建了免疫毒素DT-ScFv，二者之间添加了connector序列，免疫毒素基因PCR连接测序以后，将其克隆入pET28a质粒，在BL21（DE3）工程菌中诱导表达，通过免疫印迹鉴定表达的重组蛋白，并通过与表达HIV-1 gp120的靶细胞的间接免疫荧光实验，验证免疫毒素的细胞识别结合能力。结果本研究成功地构建了免疫毒素DT-ScFv，经原核表达证明目的蛋白以部分可溶的形式存在于表达菌中，添加的connect

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