【摘 要】
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目的：采用天然低共熔溶剂（Natural deep eutectic solvents，NADES）提取米糠酯酶并优化提取工艺参数，纯化米糠酯酶获得高纯度米糠酯酶，并探究其酶学特性。方法：合成了10种不同的NADES、选用了水浴搅拌和超声两种处理方式进行筛选，然后对提取效果最佳的NADES和方法进行单因素和响应面优化，参数包括料液比、含水量、提取温度和提取时间；将最优提取工艺得到的粗酶液通过阴离子
【机 构】
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广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所农业农村部功能食品重点实验室广东省农产品加工重点实验室
【基金项目】
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广东省重点领域研发计划（2019B020213002）； 广东省财政厅专项（粤财农[2021]161号，粤财农[2021]170号）； 广东省现代农业产业共性关键技术研发创新团队建设项目（2021KJ117）； 科技创新战略专项资金（高水平农科院建设）—（R2018PY-JC002，R
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目的：采用天然低共熔溶剂（Natural deep eutectic solvents，NADES）提取米糠酯酶并优化提取工艺参数，纯化米糠酯酶获得高纯度米糠酯酶，并探究其酶学特性。方法：合成了10种不同的NADES、选用了水浴搅拌和超声两种处理方式进行筛选，然后对提取效果最佳的NADES和方法进行单因素和响应面优化，参数包括料液比、含水量、提取温度和提取时间；将最优提取工艺得到的粗酶液通过阴离子交换树脂DEAE纯化，然后进行酶学性质的探究。结果：最佳提取米糠酯酶的工艺：在含有5%水分的脯氨酸-甘油（摩尔比1:2）溶剂体系中，水浴搅拌3.0 h，温度74.0 ℃，米糠和溶剂料液比为9:30，此时米糠酯酶活力为2.96 U。通过阴离子交换树脂DEAE纯化，获得了纯度较高的米糠酯酶，纯化倍数为1.74倍，纯化率为70.01%，分子量约为35 kDa，对硝基苯酚乙酯为最适底物，最适温度和 pH 分别是40.0 ℃、pH = 8.0，在30.0～40.0 ℃和pH 7.0～9.0 时米糠酯酶均保持良好的稳定性。氯化胆碱-甘油、甜菜碱-甘油和脯氨酸-甘油三种 NADES 对米糠酯酶的活力有较好的维持作用。结论：天然低共熔溶剂提取方式是一种简单、绿色的提取方式，可为生物活性化合物的绿色提取研究提供一些参考。
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