【摘 要】
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[目的]构建水通道蛋白1（AQP1）基因3’-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-204与AQP1基因的靶向调控关系。[方法]采用生物信息学软件预测miR-204与AQP1基因的结合位点;荧光定量PC
【机 构】
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深圳市南山区妇幼保健院检验科; 南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(81672754;30901721);广东省自然科学基金项目(2015A030313249);广东省医学科研基金项目(A2017112);深圳市南山区科技计划项目(2017006)
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[目的]构建水通道蛋白1（AQP1）基因3’-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-204与AQP1基因的靶向调控关系。[方法]采用生物信息学软件预测miR-204与AQP1基因的结合位点;荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测转染miR-204抑制剂前后miR-204及AQP1在K562细胞中的表达改变;构建AQP1-3’UTR野生型及突变型重组质粒,与miR-204、阴性对照共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。[结果]转染miR-204抑制剂后,miR-204表达量较阴性对照及空白对照组明显下降,分别为1.97、9.32、11.25（P <0.01）;而AQP1基因表达显著增高,分别为13.14、2.29、2.54（P <0.01）;酶切及测序结果表明已成功构建psiCHECKTM-2-AQP1 3’-UTR野生型和突变型重组质粒。荧光素酶活性结果表明,miR-204可使野生型AQP1 3’-UTR质粒荧光素酶活性降低约65.9%,而对突变型质粒荧光素酶活性没有显著影响。[结论]成功构建了AQP1基因3’-UTR的荧光素酶报告基因载体,miR-204对AQP1存在靶向调控。
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