人白细胞介素6cDNA克隆的分离与鉴定

来源 :生物化学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang_250
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我们从重组的人α干扰素处理的单层HeLa细胞常规提取Poly(A)+RNA作为逆转录合成cDNA第一链之模板,用引物-适配接头法在噬菌质粒pTz19R中构建cDNA文库。以32p-标记的480bpIL-6cDNA片段作探针进行菌落原位及狭缝印迹杂交,筛选出6个阳性克隆。其中两个克隆并用限制酶切分析及DNA序列测定做进一步鉴定。结果证明,一个克隆的cDNA片段长1.3kb,含有人白介素6全长编码区;另一个的cDNA插入片段为0.9kb,缺乏信号肽及成熟IL-6N端30个残基的编码序列。
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