【摘 要】
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目的:设计并验证能够高效切割TMEM16A位点的sgRNA,结合显微注射法与CRISPR/Cas9基因编辑技术,为TMEM16A基因敲除小鼠奠定基础.方法:使用预测软件设计TMEM16A位点的sgRNA,筛选
【机 构】
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中南民族大学生命科学学院 430074;
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目的:设计并验证能够高效切割TMEM16A位点的sgRNA,结合显微注射法与CRISPR/Cas9基因编辑技术,为TMEM16A基因敲除小鼠奠定基础.方法:使用预测软件设计TMEM16A位点的sgRNA,筛选得到脱靶效率最低的四条sgRNA,通过体外筛选得到稳定切割的两条sgRNA.结论:获得俩个能够引导高效切割的TMEM16A位点通用型sgRNA,从而为基因CRISPR技术在TMEM16A位点定点敲除基因奠定基础.sgRNA体外活性能够预测sgRNA在体内的切割活性,表明体外活性验证是筛选高活性sgRNA的有效手段.
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