铜绿假单胞菌外毒素A全基因的克隆与分泌性表达

来源 :微生物学免疫学进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuyuan0127
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利用PCR技术从铜绿假单胞菌PA103株DNA中扩增到铜绿似单胞菌外毒素A(EPA)全基因,选择合适位点插入pBV221PLP。启动子下游,构建分泌性表达载体;转化宿主E.coilDH5α、JM109后,热诱导表达;SDS—PAGE分析表明表达产物占菌体总蛋白量的17%左右,分子量69kD左右;分离细胞组分蛋白发现仅有少基重组蛋白以成熟毒素形式分泌到宿主茵的周质间隙,并能检测到Vero细胞毒活性,其余大部分以包涵体形式存在。免疫印迹检测显示,表达产物与兔抗EPA多抗有特异性反应。此项工作为重组EPA的研制
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